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文檔簡介
1、本研究首先根據植物偏愛密碼子優(yōu)化了人Tα1基因的核苷酸序列,然后人工合成了Tα1基因。由于Tα1基因非常小,為了增加其在植物中的表達量,我們嘗試將它首尾相連形成四聯(lián)體Tα1④,每個單體之間由腸激酶識別位點編碼序列隔開,表達出的四聯(lián)體小肽通過口服進入腸道后會被腸激酶分解成單體小肽而發(fā)揮作用。Tα1基因、Tb1④基因及經過密碼子優(yōu)化的lf基因被克隆到雙元載體pBI121中,構建了植物表達載體pBI121Tα1、pBI121Tα1④、pBI1
2、21LF。同時我們還根據已報道的番茄果實成熟過程中受乙烯調控的果實特異性表達的E8基因啟動子序列設計了引物,克隆了番茄中蔬5號的E8啟動子,并構建了由E8啟動子驅動lf基因表達的載體pBIE8LF,以及分別由CaMV35S啟動子驅動Tα1基因和lf基因基因表達的雙價植物表達載體pBITL。構建好的植物表達載體利用凍融法轉入農桿菌菌株LBA4404中,并侵染了番茄子葉外植體,經過卡那霉素篩選,最終得到了再生植株67株?! ∞D基因番茄中表
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