Th極化關(guān)鍵基因TBX21和TIM-1與甲-乙型肝炎及自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景：我國肝病臨床資源豐富。與西方國家以脂肪肝、酒精性肝炎、丙型肝炎、藥物性肝炎和自身免疫性肝病為主的慢性肝病譜不同，慢性乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染相關(guān)慢性肝病(慢性乙型肝炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌)一直是我國主要的肝病類型。同時，丙型、甲型、戊型肝炎病毒感染也不容忽視，病毒性肝炎成為我國的優(yōu)勢疾病資源。同時，隨著診斷方法和重視程度的提高，自身免疫性肝病的就診率和診斷率不斷上升。自身免疫疾病存在顯著的種族

2、差異(發(fā)病率、臨床表現(xiàn))，如中國人群自身免疫性肝病合并其他系統(tǒng)自身免疫疾病者少見，我國自身免疫性肝病的臨床特點及遺傳易感性尚未得到充分的研究。 鑒定病毒性肝炎和自身免疫性肝炎的遺傳因素是一個重要同時又具有挑戰(zhàn)性的問題，目前的認(rèn)識并不充分。對于病毒性肝炎和自身免疫性肝炎這類常見復(fù)雜疾病，基于病例.對照設(shè)計的遺傳關(guān)聯(lián)研究的廣泛使用，通常根據(jù)生物學(xué)功能選擇候選基因進(jìn)行遺傳變異與疾病關(guān)聯(lián)的檢測。T輔助細(xì)胞(Th)極化在病毒性肝炎和自身免

3、疫性肝炎的病理生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。近年的研究表明T-bet(由TBX21基因編碼)和TIM-1分子是Th細(xì)胞極化的關(guān)鍵分子，在病毒感染及自身免疫疾病發(fā)病過程中發(fā)揮著極其重要的作用。 T-bet屬于T-box轉(zhuǎn)錄因子家族，是調(diào)節(jié)Th細(xì)胞分化的T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，也是CD8+初始T細(xì)胞分化為CTL的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。T細(xì)胞T-bet蛋白水平的下降與機體對一些病毒感染的反應(yīng)性降低有關(guān)，例如HIV感染以及土撥鼠肝炎病毒(woodch

4、uckhepatitisvirus，WHV)感染；而T細(xì)胞T-bet蛋白水平的升高與炎癥反應(yīng)的結(jié)局相關(guān)，例如Th1介導(dǎo)的腸炎及肝損傷。人類T-bet蛋白由TBX21基因編碼，其常見單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)位點位于啟動子區(qū)。T-1993C位點變異影響TBX21基因的轉(zhuǎn)錄活性。 T細(xì)胞表面免疫球蛋白-黏蛋白樣結(jié)構(gòu)蛋白1(Tcellimmunoglobindomainandmu

5、cindomainprotein1，TIM-1)是一種膜表面糖蛋白，表達(dá)于CD4+T輔助細(xì)胞表面，影響CD4+T輔助細(xì)胞發(fā)生Th1/Th2極化的關(guān)鍵時期。其在活化的Th2細(xì)胞表面高表達(dá)，作為共刺激分子，誘導(dǎo)Th2活化增殖。與此同時TIM-1也是目前已知的甲型肝炎病毒進(jìn)入細(xì)胞的唯一受體。人群中TIM-1基因存在多態(tài)性，其外顯子4編碼的粘蛋白結(jié)構(gòu)域存在插入缺失變異。 目的：TBX21和TIM-1基因遺傳變異與病毒性肝炎和自身免疫性肝

6、炎的關(guān)系值得探討。本研究基于醫(yī)院和社區(qū)收集病例對照，采用生物學(xué)功能候選基因一遺傳關(guān)聯(lián)策略，進(jìn)行Th細(xì)胞極化關(guān)鍵基因TBX21和TIM-1與乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染、甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus，HAV)感染和自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)研究。 方法：主要研究工作有： 1.在本單位以前的樣本庫基礎(chǔ)上，新收集到1758份人群樣本，其中包括男性1241人，女性517人，涵蓋了正常對

7、照人群、慢性HBV感染者/自限性清除者、甲型肝炎顯性感染患者、隱性感染者、HAV標(biāo)志物全陰性者以及自身免疫性肝炎患者等臨床分組，成功提取DNA。完成新收集到的1758份樣本相關(guān)病史資料查閱和資料的錄入，并對我所前期工作中收集到的4700余例病人病史資料進(jìn)行完善。對上述病史資料進(jìn)行整理，剔除重復(fù)，獲得包括完整病史資料、血DNA和血清的樣本4181人份，完成了DNA提取及Panel制作。 2.對dbSNP數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)報道的TBX21

8、基因的8個SNP位點，T-1993C、T-1514C、G-1499A、C99G、T1298C、G6547A、T7725C、T9903C，在我們的代表性樣本中進(jìn)行了測序驗證及分型方法探索。 3.對TIM-1基因外顯子4多態(tài)性進(jìn)行了克隆-測序發(fā)掘，構(gòu)建了單倍型，并摸索了157MVTTTP插入缺失多態(tài)性的GeneScan分型方法。 4.選擇了TBX21基因T-1993C和TIM-1基因157MVTTTP插入缺失多態(tài)位點，對正常

9、對照人群、慢性HBV感染者/自限性清除者、甲型肝炎顯性感染患者、隱性感染者、HAV標(biāo)志物全陰性者以及自身免疫性肝炎患者進(jìn)行了基因分型及疾病關(guān)聯(lián)分析。 結(jié)果：主要研究結(jié)果有： 1.重慶人群中，TBX21基因外顯子區(qū)和啟動子區(qū)的最高頻多態(tài)位點是T-1993C，國外報道的G-1499A和T9903C位點頻率極低(等位頻率＜1％)。 2.重慶人群中，TIM-1基因外顯子4有高度多態(tài)性，主要單倍型有4種。 3.以無

10、癥狀攜帶者為對照，TBX21基因T-1993C位點與慢性HBV感染疾病進(jìn)程無顯著關(guān)聯(lián)。以隱性感染者為對照，TBX21基因T-1993C位點與HAV感染疾病狀態(tài)無顯著關(guān)聯(lián)。 4.以慢性HBV感染者為對照，TBX21基因T-1993C位點與HBV自限性清除存在顯著的關(guān)聯(lián)(x2=20.4，P=0.0000063);啟動子區(qū)單倍型.1993T-1514T顯著降低慢性HBV感染的風(fēng)險(P=0.000017，OR=0.46，95％CI0.3

11、2～0.65)。 5.以獻(xiàn)血員為對照，TBX21基因T-1993C位點與自身免疫性肝炎存在顯著關(guān)聯(lián)，-1993T等位與自身免疫性肝炎顯著相關(guān)(x2=13.7，P=0.00004)。多因素Logistic回歸校正年齡、性別等因素，-1993T/T純合子發(fā)生自身免疫性肝炎的風(fēng)險度顯著升高(P=0.00043,OR=0.26，95％CI=0.12～0.55)。 6.TIM-1基因157MVTTTP插入缺失多態(tài)位點對HBV感染、

12、HAv感染和自身免疫性肝炎的遺傳風(fēng)險度沒有顯著影響。 結(jié)論：我們基于醫(yī)院的病例對照研究結(jié)果表明，TBX21基因T-1993C位點與HBV自限性清除及自身免疫性肝炎相關(guān)聯(lián)。根據(jù)文獻(xiàn)報道，疾病關(guān)聯(lián)的T-1993C位點是TBX21基因啟動子的潛在調(diào)節(jié)性SNP位點，其遺傳變異影響TBX21基因的轉(zhuǎn)錄活性，-1993C等位的轉(zhuǎn)錄活性較強。有關(guān)TBX21基因T-1993C位點與HBV自限性清除及自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)及機制，值得進(jìn)一步深入