慢乙肝肝腎陰虛證與瘀血阻絡證相關分子機理研究.pdf

1、目的：研究慢乙肝肝腎陰虛證、瘀血阻絡證患者的白細胞基因表達譜及HBV前C區(qū)變異情況與相應證候之間的相關機制。 方法：1.參照《1995年第五次全國傳染病寄生蟲病學術會議討論修訂，病毒性肝炎防治方案(試行)》(中華內科雜志，1995，(11)：788～791)為納入及排除標準；《中國中醫(yī)藥學會肝病專委會，病毒性肝炎中醫(yī)辯證標準(試行)》為辨證標準，分別于臨床選取辨證符合肝腎陰虛證患者34人，以及瘀血阻絡證患者40人。 2.

2、抽取患者靜脈血，分離血清，提取HBV-DNA，經(jīng)PCR擴增反應，與乙型肝炎病毒前C區(qū)變異基因芯片雜交，將雜交后晾干之芯片用GenePixPersonal4100A基因芯片掃描儀掃描.掃描圖像用Imagene圖像分析軟件掃描結果進行定量分析。依據(jù)乙型肝炎病毒前C區(qū)變異基因芯片檢測結果計算機自動進行結果判定。包括乙肝病毒前C區(qū)變異基因1896、1899、1862、1764、1762位點檢測結果。計算各證型不同位點變異率(％)和不同位點野生株

3、、變異株信號強度。所得數(shù)據(jù)中率的比較采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗。 3.在兩證型患者中各隨機選取一人，抽取靜脈血，分離白細胞，TRIzol法抽提總RNA，線性放大RNA后，用反轉cDNA第一鏈標記制備熒光探針，并以QIAquickNucleotideRemovalKit純化熒光探針，將純化好的探針轉入酶標板，分別測定A260、A550、A650后，芯片雜交完成后，采用Genespring進行Normalize處理分析，最后r

4、atio值為cy3/cy5(實驗組/對照組)。差異基因篩選標準為ratio≥2為上調基因，ratio≤0.5為下調基因。所得數(shù)據(jù)用MicrosoftAccess、MicrosoftExcel軟件處理。 結果：1.HBV前C區(qū)檢測結果：HBV前C區(qū)變異率1762位點：肝腎陰虛證32.35％，瘀血阻絡證92.5％，兩證之間有顯著性差異，P＜0.001；1764位點：肝腎陰虛證38.24％，瘀血阻絡證90％，兩證之間有顯著性差異，P＜

5、0.001；1896位點：肝腎陰虛證67.65％，瘀血阻絡證30％。兩證之間有顯著性差異，P＜0.001。變異株信號強度：1762、1764、1899位點：瘀血阻絡＞肝腎陰虛；1896位點：肝腎陰虛＞瘀血阻絡。 2.白細胞基因表達譜檢測結果：肝腎陰虛證：上調397條，下調628條。瘀血阻絡證：上調435條，下調530條。兩證型涉及生物學過程廣泛，與細胞周期和免疫學相關有：NF-kappaB誘導激酶，CDK活動調節(jié)，RAS蛋白信號

6、轉導，RhoGTP酶激活子，MAPK通路，胰島素樣生長因子，JNK信號級連，整合素介導的信號通路，TNF與TNF受體活動，TGFβ受體，干擾素γ，白介素-1、-6、-10、-12，NO生物合成，前列腺素D2生物合成、白三烯B4生物合成與代謝等。 結論：1.HBV前C區(qū)突變與肝腎陰虛證和瘀血阻絡證有一定相關。2.慢乙肝肝腎陰虛證和瘀血阻絡證患者的白細胞基因表達譜與正常人不同.3.肝腎陰虛證和瘀血阻絡證患者白細胞基因表達譜兩證型間存