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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:
隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生活水平的提高,生活方式的改變和生活節(jié)奏的加快,肥胖的發(fā)病率近年來(lái)呈現(xiàn)急劇上升的趨勢(shì),并且由肥胖導(dǎo)致的代謝紊亂疾病的發(fā)病率也隨之增加,肥胖及其相關(guān)疾病的研究已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界和營(yíng)養(yǎng)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)之一。近年來(lái)的研究表明,脂肪組織不僅可以?xún)?chǔ)存能量,還具有內(nèi)分泌的功能。脂聯(lián)素(adiponectin,APN)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的由脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,在調(diào)節(jié)糖代謝和能量平衡、改善胰島素敏感性和抗動(dòng)脈粥樣硬化等方面
2、的作用倍受關(guān)注。n-6和n-3系列多不飽和脂肪酸(PUAFs)在調(diào)節(jié)糖脂代謝和脂肪細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用,現(xiàn)有研究也大多數(shù)支持改變膳食脂肪酸構(gòu)成能夠改善由肥胖引起的相關(guān)代謝性疾病,并且觀察到總是伴隨著體內(nèi)脂聯(lián)素水平的改變。但n-6/n-3多不飽和脂肪酸構(gòu)成對(duì)脂聯(lián)素的調(diào)節(jié)作用尚不明確。
目的:
本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)體外培養(yǎng)的3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,觀察不同比例、不同濃度的n-6/n-3多不飽和脂肪酸構(gòu)成對(duì)脂聯(lián)素
3、表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)能提高脂聯(lián)素表達(dá)的適宜脂肪酸比例和濃度,并初步探討n(yōu)-6/n-3多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)脂聯(lián)素表達(dá)的分子機(jī)理。其研究結(jié)果將為肥胖相關(guān)疾病的預(yù)防和治療提供新的思路和科學(xué)依據(jù),也為確定膳食中n-6/n-3脂肪酸的適宜構(gòu)成提供新的重要的參考依據(jù),有重要的理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。
方法:
1.以體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,n-6系的亞油酸(Linoleic acid,LA)、n-3系
4、的二十二碳六烯酸(Docosahe--xaenoic acid,DHA)為受試物,觀察經(jīng)不同比例(LA/DHA為1∶1,5∶1,10∶1,20∶1和30∶1);一定濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的LA、DHA處理后,3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素及PPARγ基因表達(dá)水平的變化(Realtime PCR相對(duì)定量法),觀察各受試物是否通過(guò)PPARγ來(lái)影響脂聯(lián)素的表達(dá);
2.觀察經(jīng)不同比例(LA/DHA為1∶
5、1,5∶1,10∶1,20∶1和30∶1);一定濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的LA、DHA處理后,3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平的變化(western-blotting相對(duì)定量法);
3.所得數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0分析。如果方差齊,組間比較采用單因素方差分析(One Way ANOVA),兩兩比較采用LSD T-test或dunnett T-
6、test,如果方差不齊,運(yùn)用Welch法和Dunnett's T3法分別進(jìn)行組間比較和兩兩比較。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異顯著。
結(jié)果:
1.n-6/n-3PUFAs構(gòu)成對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響
1.1 n-6/n-3PUFAs為1∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-
7、3PUFAs(1∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,各濃度組脂聯(lián)素mRNA表達(dá)均增加,分別比對(duì)照組增加118.18%(p=0.001)、152.73%(p=0.000)、154.55%(p=0.000)、56.36%(p>0.05)、38.18%(p>0.05);在25、50、100μmol/L時(shí)表達(dá)增加最顯著。
在濃度為50、100μmol/L時(shí),PPARγ mRNA表達(dá)顯著增加,與對(duì)照組相比分別增108.33
8、%(p=0.008)和80.56%(p=0.045);其余濃度表達(dá)無(wú)顯著差異。經(jīng)Pearson相關(guān)分析,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與PPARγ mRNA表達(dá)總體趨勢(shì)存在顯著正相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.863,P=0.000。
1.2 n-6/n-3PUFAs為5∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(5∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)
9、胞24h,在濃度為25、50、100μmol/L時(shí),脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)均高于對(duì)照組,在25μmol/L時(shí)最為顯著,比對(duì)照組增加66%(p=0.000);隨著濃度的增加,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)下降,在400μmol/L時(shí)顯著低于對(duì)照組,減少78%(p=0.000)。
在濃度為25、50μmol/L時(shí),PPARγ mRNA的表達(dá)增加,在50μmol/L顯著增加,比對(duì)照組增加64.36%(p=0.003);隨著濃度的繼續(xù)增加,PP
10、ARγ mRNA表達(dá)均下降,在200、400μmol/L時(shí),分別比對(duì)照組減少44.55%(p=0.029)和55.45%(p=0.008)。經(jīng)Pearson相關(guān)分析,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與PPARγ mRNA表達(dá)總體趨勢(shì)存在顯著正相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.590,P=0.010。
1.3 n-6/n-3PUFAs為10∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的
11、n-6/n-3PUFAs(10∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,在濃度為50μmol/L時(shí)脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)顯著增加,比對(duì)照組增加50.85%(p=0.019);其他濃度組PPARγ mRNA表達(dá)均下降,當(dāng)濃度為200、400μmol/L時(shí),表達(dá)顯著下降,比對(duì)照組分別減少13.56%(p=0.001)和77.97%(p=0.001)。
在濃度為50μmol/L時(shí),PPARγ mRNA的表達(dá)比對(duì)照組增加38.1
12、0%(p>0.05);其他濃度組PPARγ mRNA表達(dá)均下降,當(dāng)濃度為400μmol/L時(shí),表達(dá)顯著下降,比對(duì)照組減少65.48%(p=0.003)。經(jīng)Pearson相關(guān)分析,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與PPARγ mRNA表達(dá)總體趨勢(shì)存在顯著正相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.791,P=0.000。
1.4 n-6/n-3PUFAs為20∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μm
13、ol/L)的n-6/n-3PUFAs(20∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,在濃度為50μmol/L時(shí),脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)增加,但無(wú)顯著差異;其他濃度組脂聯(lián)素的表達(dá)均下降,當(dāng)濃度為200、400μmol/L時(shí),表達(dá)顯著下降,比對(duì)照組分別減少13.56%(p=0.004)和77.97%(p=0.002)。
在濃度為50μmol/L時(shí),PPARγ mRNA的表達(dá)增加,但無(wú)顯著差異;其他濃度組PPAR
14、γ mRNA表達(dá)均下降,當(dāng)濃度為200、400μmol/L時(shí),表達(dá)顯著下降,比對(duì)照組分別減少50%(p=0.004)和60.29%(p=0.001)。經(jīng)Pearson相關(guān)分析,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與PPARγ mRNA表達(dá)總體趨勢(shì)存在顯著正相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.970, P=0.000。
1.5 n-6/n-3PUFAs為30∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素及PPARγ mRNA表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μm
15、ol/L)的n-6/n-3PUFAs(30∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,各濃度組脂聯(lián)素的表達(dá)均下降,隨著濃度的增加,下降趨勢(shì)越明顯,當(dāng)濃度為50、100、200和400μmol/L時(shí),表達(dá)顯著下降,比對(duì)照組分別減少44.83%(p=0.012)、49.14%(p=0.006)、48.28%(p=0.008)和63.97%(p=0.001)。
與對(duì)照組相比,各濃度組PPARγ mRNA的表達(dá)均顯
16、著下降,隨著濃度的增加,下降趨勢(shì)越明顯,比對(duì)照組分別減少27.59%(p=0.001)、22%(p=0.001)、37%(p=0.000)、50%(p=0.000)和56%(p=0.000)。
經(jīng)Pearson相關(guān)分析,脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與PPARγ mRNA表達(dá)總體趨勢(shì)存在顯著正相關(guān)關(guān)系。相關(guān)系數(shù)r=0.793,P=0.000。
2.n-6/n-3PUFAs構(gòu)成對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響
17、r> 2.1 n-6/n-3PUFAs為1∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(1∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,各濃度組脂聯(lián)素的表達(dá)均增加,50、200、400μmol/L處理組脂聯(lián)素蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比略有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05);25、100μmol/L處理組對(duì)照組相比,脂聯(lián)素蛋白表達(dá)分別顯著增加24.77%
18、(P<0.05)、28.50%(P<0.05)。
2.2 n-6/n-3PUFAs為5∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(5∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,除400μmol/L濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)略有降低(5.88%)外,其他各濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)均增加,50、100、200μmol/L處理組脂聯(lián)素蛋白表達(dá)與對(duì)照
19、組相比略有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05);25μmol/L處理組對(duì)照組相比,脂聯(lián)素蛋白表達(dá)顯著增加15.11%(P<0.05)。
2.3 n-6/n-3PUFAs為10∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(10∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,在濃度為25、50、100μmol/L時(shí),脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)均高于對(duì)照組,
20、在100μmol/L時(shí)最為顯著,比對(duì)照組增加14.32%(P<0.05);隨著濃度的增加,脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)下降,在400μmol/L時(shí)顯著低于對(duì)照組,減少16.21%(P<0.05)。
2.4 n-6/n-3PUFAs為20∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(20∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,在濃度為25、50、1
21、00、200μmol/L時(shí),脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)無(wú)顯著差異,隨著濃度的增加,脂聯(lián)素蛋白表達(dá)下降,在400μmol/L時(shí)顯著低于對(duì)照組,減少26.57%(P<0.05)。
2.5 n-6/n-3PUFAs為30∶1時(shí)對(duì)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響以不同濃度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-6/n-3PUFAs(30∶1)分別處理3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞24h,與對(duì)照組相比,各濃度組脂聯(lián)素蛋白的表達(dá)均降低,在50、1
22、00、200、400μmol/L時(shí)顯著低于對(duì)照組,分別減少51.54%(P=0.000)、52.04%(P=0.000)、62.34%(P=0.000)、61.93%(P=0.000)。
結(jié)論:
1.n-6/n-3PUFAs構(gòu)成比的不同對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素表達(dá)的影響不同,在n-6/n-3PUFAs構(gòu)成比為1∶1和5∶1時(shí)顯著上調(diào)脂聯(lián)素的表達(dá),隨著n-6/n-3PUFAs構(gòu)成比的增加,對(duì)脂聯(lián)素表達(dá)的促進(jìn)
23、作用逐漸下降,在30比1時(shí)完全抑制脂聯(lián)素的表達(dá)。
2.在一定濃度范圍(25、50、100μmol/L)內(nèi),n-6/n-3PUFAs能上調(diào)3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素的表達(dá),呈劑量依賴(lài)關(guān)系;在200μmol/L濃度以上時(shí)多呈現(xiàn)為抑制脂聯(lián)素表達(dá)。n-3PUFAs比n-6PUFAs更能促進(jìn)脂聯(lián)素的表達(dá)。
3.經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),脂聯(lián)素與PPARγ基因表達(dá)之間存在顯著正相關(guān)關(guān)系,提示n-6/n-3PUFAs影響脂聯(lián)素的表
24、達(dá)有可能通過(guò)激活或抑制PPARγ的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。
4.本研究結(jié)果提示脂肪酸的構(gòu)成、濃度等都是影響脂聯(lián)素表達(dá)的重要因素,n-6PUFAs在適當(dāng)范圍(n-6/n-3PUFAs為1∶1和5∶1)內(nèi)可能上調(diào)脂聯(lián)素PPARγ基因的表達(dá),但是隨著n-6/n-3PUFAs比例的增加主要表現(xiàn)為抑制作用,而n-3PUFAs則主要表現(xiàn)為上調(diào)脂聯(lián)素和PPARγ基因的表達(dá),由此可以推測(cè)可以通過(guò)調(diào)整膳食脂肪酸n-6/n-3PUFAs構(gòu)成比、濃度等來(lái)增
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