小麥糖原合成酶激酶（TaGSK1）的生化特性分析.pdf

1、河北師范大學碩士學位論文小麥糖原合成酶激酶（TaGSK1）的生化特性分析姓名：楊立霞申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：沈銀柱黃占景20050501河北師范大學碩士研究生學位論文摘要本室前期的研究工作表明：小麥糖原合成酶激酶基因(TaGSKI)是小麥耐鹽突變體R118706—49中與耐鹽相關(guān)的基因；將TaGSKI基因?qū)胍吧蛿M南芥中研究其功能發(fā)現(xiàn)小麥糖原合成酶激酶TaGSKI具有增強植物細胞抗脅迫、滲透的能力；軟件分析TaGSKI

2、具有鈣調(diào)素結(jié)臺域。本實驗從蛋白水平對TaGSKI蛋白的生化特性進行了研究。構(gòu)建原核表達載體pGEX—KG—TaGSKl，轉(zhuǎn)化EcoliXa90后經(jīng)IPTG誘導融合蛋白可溶性表達，采用GST親和層析柱進行目的蛋白純化，獲得純度達到90％以上的Mr約為65kD的GSTTaGSKI融合蛋白。對提純的小麥糖原合成酶激酶TaGSKI進行生化特性的研究。首先利用天然電泳方法檢測該蛋白與CaM的結(jié)合特性，厲又用westernbloting加以證。結(jié)果

3、顯示該蛋白表現(xiàn)出依賴于Ca”的與CaM結(jié)合的特性，而Ca”螯合劑EGTA處理會抑制TaGSKI與CaM的結(jié)合，對TaGSKI具有鈣調(diào)素結(jié)合域的預測加以了試驗證實，進一步明確了在Ca”存在的條件下，TaGSKI與CaM的結(jié)合。ScanProsite進行功能位點預測，TaGSKI蛋白在第51aa到75aa處具有ATP結(jié)合位點，第166aa到178aa處具有ser／thr蛋白激酶活性位點。檢測該激酶的自磷酸化與底物磷酸化，以HistoneII