豬生長激素基因的克隆及在COS-7細胞的表達研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以長白豬垂體總RNA為模板，通過RT-PCR克隆了豬生長激素(pGH)基因編碼區(qū)cDNA。1.0％瓊脂糖電泳檢測RT-PCR產物，膠回收PCR產物并通過T-A法亞克隆到pMD18-T載體中轉化到DH5αE.coli，重組質粒經酶切鑒定后進行序列分析。序列分析表明，克隆得到的豬生長激素基因pGH編碼216個氨基酸殘基，分子量為24.4KDa，等電點為7.26；疏水氨基酸44.9％，親水氨基酸30.6％，堿性氨基酸13.0％，酸性氨基

2、酸11.6％。其1-26aa為pGH信號肽序列，27-216aa為成熟肽序列。pGH與Seeburg等(1983)報道的豬GH蛋白序列(AAA31045)的同源性為100％，與Kato等(1990)報道的豬GH相比在蛋白質序列(CAA37411)有99.1％的同源性，與Qi等(1989)和Chowdhary等(1994)報道的豬GH蛋白序列(AAA73477，NP999034)的同源性為97.7％，與Qi等(1989)報道的豬GH蛋白序

3、列(AAA73478)的同源性為97.2％?！　⒁芽寺〉呢i生長激素(pGH)基因cDNA片斷定向插入VR1020質粒，轉化大腸桿菌DH5α，用菌落PCR和質粒PCR方法篩選陽性克??；以BamHI和EcoRI酶切鑒定重組真核表達質粒VpGH。利用脂質體法介導VpGH轉染哺乳動物細胞COS-7，對轉染后的COS-7細胞進行RT-PCR、ELISA和免疫熒光分析，分別在轉錄和翻譯水平證實了目的基因在COS-7細胞中得到正確轉染表達。本研究

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