豬圓環(huán)病毒2型抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒的研制和應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、利用已構(gòu)建的基因工程重組菌BL21(DE3)表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)ORF2編碼的結(jié)構(gòu)蛋白,并成功摸索出一種快速純化該蛋白的方法.用純化的蛋白作為包被抗原,建立了檢測(cè)豬血清中PCV2抗體的間接ELISA方法;以該方法為基礎(chǔ)初步組裝出試劑盒,并進(jìn)行了初步應(yīng)用.對(duì)ELISA的反應(yīng)條件進(jìn)行了探索,確定了最適工作條件.結(jié)果表明,重組蛋白抗原的最適包被濃度為0.1μg/mL,最適包被條件為37℃2h加4℃過(guò)夜;待檢血清的稀釋度為1:40;H

2、RP-兔抗豬IgG的工作濃度為1:800;待檢血清和酶標(biāo)二抗的反應(yīng)條件和反應(yīng)時(shí)間均為37℃30min;底物室溫顯色10~15min;陰陽(yáng)性臨界值為0.4.經(jīng)阻斷試驗(yàn)、交叉反應(yīng)試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn),表明建立的間接ELISA方法是特異的,且重復(fù)性很好;與間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)進(jìn)行比較,其敏感性和特異性分別是94.3﹪和90﹪,說(shuō)明兩種檢測(cè)方法間無(wú)顯著性差異;進(jìn)行了試劑盒的組裝及其保存期試驗(yàn),結(jié)果表明試劑盒在4℃下至少可保存三個(gè)月.用試劑盒檢

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