1872.重組肝再生增強(qiáng)因子(ralr)的50l發(fā)酵與高效分離純化研究

1、l單位代礙10476l學(xué)號(hào)1404塒0731分類號(hào)Q81河南衙瓢大學(xué)碩士學(xué)位論文(專業(yè)學(xué)位)重組肝再生增強(qiáng)因子(rALR)的50L發(fā)酵與高效分離純化研究專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位類別申請(qǐng)人指導(dǎo)教師：生物工程：工程碩士：李鵬飛：徐存拴教授張世馥教授二。一七年五月摘要肝再生增強(qiáng)因子(augmenterofliverregeneration，ALR)在肝臟損傷和肝再生過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，是一種潛在的肝臟疾病靶向藥物。目前國(guó)內(nèi)外研究主要針對(duì)其作用

2、機(jī)理進(jìn)行研究，利用生物工程制備重組ALR(recombinantaugmenterofliveregeneration，rALR)也停留在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模，尚未大規(guī)模應(yīng)用。本論文選用畢赤酵母為表達(dá)宿主，并針對(duì)rALR的高效表達(dá)、規(guī)模放大和純化等過(guò)程中的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了研究，并在純化過(guò)程中首次引入雙水相萃取技術(shù)，最終獲得了高表達(dá)量、高純度和高活性的rALR。主要研究?jī)?nèi)容包括：(1)rALR的高效表達(dá)工程菌的構(gòu)建及篩選：優(yōu)化ALR基因序列并構(gòu)建至3

3、種畢赤酵母表達(dá)載體(pPIC9、pPIC9K、pPICZa—A)，分別轉(zhuǎn)入3種宿主菌(X33、GSl15和SMDI168)，對(duì)得到的7種載體一宿主組合進(jìn)行鑒定、誘導(dǎo)表達(dá)，最終篩選得到rALR的高效表達(dá)菌株。結(jié)果表明，pPICZaA／X33組合的表達(dá)量高于pPIC9／GSll5、pPIC9K／GSl15、pPICZotA／GSl15組合，顯著高于pPIC9／SMDl168、pPIC9K／SMDl168、pPICZaA／SMD1168組合。

4、(2)rALR的表達(dá)條件優(yōu)化和規(guī)模放大：本研究對(duì)表達(dá)過(guò)程中的關(guān)鍵因素進(jìn)行了優(yōu)化和規(guī)模放大，包括pH、誘導(dǎo)溫度、甲醇濃度、溶氧條件等，結(jié)果表明rALR在pH=55，誘導(dǎo)溫度26。C，誘導(dǎo)甲醇濃度025％，溶氧20％的最佳條件下時(shí)，誘導(dǎo)6d的表達(dá)量達(dá)到最高，且發(fā)酵規(guī)模成功放大至50L中試規(guī)模。(3)rALR的分離純化條件優(yōu)化及純化體系放大：以rALR50L規(guī)模的發(fā)酵液為研究對(duì)象，進(jìn)行分離純化條件摸索。結(jié)果表明，雙水相萃取技術(shù)具有顯著的純化效