黑曲霉提取物與水楊酸對(duì)長(zhǎng)春花懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及生物堿代謝作用的研究.pdf

1、在植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,添加誘導(dǎo)子是提高植物次生代謝有效的方法之一.該文以黑曲霉提取物和水楊酸作為誘導(dǎo)子就長(zhǎng)春花細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過(guò)程中誘導(dǎo)子與其相互作用關(guān)系及誘導(dǎo)子對(duì)生物堿代謝的影響等方面進(jìn)行初步探討,研究結(jié)果如下:毛霉、木霉、青霉、黑曲霉及酵母提取物5種真菌誘導(dǎo)子處理均能提高長(zhǎng)春花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中生物堿的含量.在長(zhǎng)春花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)末期加入濃度為300μg/mL黑曲霉誘導(dǎo)子,生物堿含量達(dá)到了666μg/gFW,是對(duì)照的1.6倍.真菌誘導(dǎo)

2、子能激發(fā)長(zhǎng)春花懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的防御性應(yīng)答反應(yīng).產(chǎn)生氧進(jìn)發(fā),細(xì)胞的氧化還原態(tài)勢(shì)發(fā)生了明顯的變化,培養(yǎng)基發(fā)生堿化現(xiàn)象,膜脂過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量大幅提高,蛋白質(zhì)含量提高,POD、CAT的活力出現(xiàn)波動(dòng)性變化,并具有一定的時(shí)序性.同時(shí),與生物堿代謝有關(guān)的PAL的活力得到提高.真菌誘導(dǎo)后加入200mmol/L氯化鈣能夠加強(qiáng)誘導(dǎo)子的誘導(dǎo)效果,生物堿含量進(jìn)一步提高,達(dá)到730μg/gFW;而10mmol/L EGTA和1mmol/L LaCl<,3>抑制

3、真菌誘導(dǎo)子的誘導(dǎo)效果,對(duì)生物堿含量沒(méi)有影響.通過(guò)添加不同濃度的水楊酸(SA),比較它們對(duì)長(zhǎng)春花細(xì)胞POD、PAL、H<,2>O<,2>含量及對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和生物堿含量的影響,結(jié)果表明,SA可提高POD及PAL的活性,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>含量的上升并有利于生物堿的合成,其中10mg/L水楊酸對(duì)生物堿合成的促進(jìn)效果明顯,生物堿含量為對(duì)照組的1.3倍.經(jīng)過(guò)300μg/mL黑曲霉誘導(dǎo)子(F0),10mg/L水楊酸(SA),300μg/mL

4、黑曲霉誘導(dǎo)子十10mg/L SA 3種處理,對(duì)長(zhǎng)春花懸浮細(xì)胞膜脂過(guò)氧化和生物堿合成的影響.結(jié)果表明:F0和SA單獨(dú)處理細(xì)胞均引起長(zhǎng)春花細(xì)胞膜脂過(guò)氧化.SA十F0聯(lián)合處理可以減輕F0單獨(dú)處理細(xì)胞所引起的膜脂過(guò)氧化程度.SA十F0聯(lián)合處理與真菌誘導(dǎo)子處理相比,較大地提高了過(guò)氧化物酶及苯丙氨酸解氨酶的活性.3種處理方法均可提高長(zhǎng)春花細(xì)胞生物堿含量,特別以F0十SA處理含量最高,達(dá)到700μg/gFW.結(jié)果顯示:在真菌誘導(dǎo)子誘導(dǎo)與水揚(yáng)酸的聯(lián)合作