血清2型鴨疫里默氏菌54KD外膜蛋白免疫原性研究.pdf

1、該研究經(jīng)過超速離心法提取到血清2型鴨疫里默氏菌外膜蛋白后,對(duì)其進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分析其蛋白條帶,外膜蛋白條帶分子量主要為17KD、32KD、50KD、54 KD、74 KD、91KD、98 KD.通過對(duì)所提的外膜蛋白做免疫印跡反應(yīng),發(fā)現(xiàn)54 KD蛋白帶陽(yáng)性反應(yīng)最明顯,采用電洗脫法對(duì)粗提到的外膜蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳,然后切下含有54KD的凝膠帶,再對(duì)其進(jìn)行水平電泳,使外膜蛋白從凝膠中完全分離出來(lái),經(jīng)過多次收集后,將所得到

2、的收集液進(jìn)行SDS-PAGE電泳,證實(shí)所回收得到的蛋白為分子量54KD的外膜蛋白.將這些含54KD外膜蛋白回收液經(jīng)蛋白含量測(cè)定后跟弗氏完全佐劑按1∶1體積比充分乳化,對(duì)8日齡雛鴨首免(蛋白量100μg/只)、首免后第14天進(jìn)行二免(蛋白量100μg/只).分別在首免前1天,首免后第7、14天,二免后第7、14、21、28天采血,用建立的間接ELISA方法測(cè)定各次所采血清的抗體水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過首免后第14天可測(cè)到有抗體產(chǎn)生;二免后第14

3、天抗體水平最高,平均效價(jià)達(dá)到640,第28天時(shí)平均抗體效價(jià)仍達(dá)到320.通過該研究可以說明:用從RA2外膜蛋白中提取到的亞單位成分(分子量為54KD的外膜蛋白)免疫鴨可以產(chǎn)生較高的抗體水平,從而證實(shí)其具有較好的免疫原性,為今后研究、開發(fā)亞單位疫苗提供方向和依據(jù).該實(shí)驗(yàn)的第二部分是用RA1、RA2滅活菌加上油佐劑、蜂膠佐劑乳化后制成RA1油佐劑苗、RA2油佐劑苗、RA1+RA2二聯(lián)油佐劑苗、RA1+RA2二聯(lián)蜂膠苗四組全菌苗,分別用于免疫