百合病毒病發(fā)病因素與病毒檢測(cè)方法的研究.pdf

1、甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文百合病毒病發(fā)病因素與病毒檢測(cè)方法的研究姓名：梁巧蘭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：徐秉良20040601甘意農(nóng)監(jiān)大學(xué)碩士學(xué)位論文種植小麥的地塊發(fā)病重；低洼積水地較高燥地發(fā)病重：不同百合品種對(duì)百合病毒的抗病性不同。4百合病毒病病株田間分布型在發(fā)病初期以聚集分布為主；發(fā)病后期以均勻分布為主，病株在田問分布的基本成分為個(gè)體群，有明顯的發(fā)病中心。理論抽樣數(shù)量的大小決定于田間病株率的高低，當(dāng)病株率在835—96

2、60％之間，實(shí)際抽樣數(shù)量為1000、2000、3000株時(shí)，其理論抽樣數(shù)在558—906、774～1655、888—2286株之間。抽樣方法比較試驗(yàn)結(jié)果表明平行線抽樣法更適合百合病毒病病株田問調(diào)查。5將采自百合田的CMVLi用特定寄主菜豆(美國(guó))純化增殖，分離提純。提純的CMVLi粒子經(jīng)電鏡觀察，紫外掃描證弱為典型的CMVLi粒子。然后焉純化的CMVLi免疫兔子制備抗血清。cMv—Li抗血清效價(jià)為1024；商品CMVLi抗血清和自制抗血

3、清對(duì)5個(gè)百合樣品的ELISA檢測(cè)結(jié)果一致。采用間接ELISA法對(duì)陰、陽性對(duì)照材料進(jìn)行了選擇，并確定了陰、陽性反應(yīng)的臨界值。用硫酸銨沉淀法提純IgG，制備了辣根過氧化物酶標(biāo)抗體和堿性磷酸酶標(biāo)抗體，建立了酶聯(lián)免疫檢測(cè)系統(tǒng)(EusA—CMVLi)，并對(duì)其所要求的各種指標(biāo)作了合理選擇。結(jié)果表明，最適包被抗體和酶標(biāo)抗體的濃度分別為5pg／ml和20ug／ml，cMV—Li檢測(cè)的有效稀釋倍數(shù)為1：32。制作了采用培G一瑚沖和培G—AP兩種酶標(biāo)抗體的

4、對(duì)黃瓜花葉病毒百合株系(CMV—n)ELISA檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，DAS—ELISA、間接ELISA和DIBAELIsA靈敏度比較試驗(yàn)結(jié)果表明，DASELISA檢測(cè)的靈敏度較高，是間接一ELISA和DIDA—ELISA靈敏度的4倍。間接一ELISA和DIBA—ELISA的檢測(cè)譜比DSA—ELISA寬，對(duì)21個(gè)百合樣品的CMV檢測(cè)結(jié)果表明，DIBAELISA的檢出率為6667％，間接一ELISA的檢出率為3809％，分別比DAS—ELISA的