花器噴霧法接種根癌農桿菌轉化矮生菜豆條件的初步探索.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、通過對農桿菌在矮生菜豆花器中的存活狀況、vir基因的表達情況、T-DNA的轉移情況的研究,初步探討了該方法在農桿菌介導的矮生菜豆的遺傳轉化中的可行性.為了更好的研究花器噴霧法的可行性,我們首先利用針刺注射花器的方法保證接種菌液進入到花器中去,對不同接種時期、不同接種菌液條件下的農桿菌存活、vir基因表達情況進行了研究.研究表明,接種的六個時期農桿菌存活都很好,vir基因表達水平也很高;接種菌液濃度(OD<,600>值表示)為0.8-1.

2、3時,vir基因表達最好;糖類物質以及細胞分裂素BAP能夠大大提高vir基因的表達水平,其中蔗糖的效果比葡萄糖好;接種菌液中是否加入乙酰丁香酮AS對vir基因的表達水平沒有影響.我們進一步利用在T-DNA上含有GUS基因的農桿菌菌株LBA4404(pTOK233)研究最佳接種時期,結果表明,最佳接種時期應在授粉之前,菜豆花現(xiàn)蕾的第一天到第二天.花器噴霧法轉化植物的難點在于接種菌液能否進入到花器中去,并到達靶標位置.研究表明表面活性劑可對

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