銀耳遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立及三個(gè)品質(zhì)基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、銀耳(Tremella fuciformis Berk.)又稱白木耳,是一種已大面積人工栽培、被人們普遍接受的滋補(bǔ)食品.該研究應(yīng)用基因工程技術(shù),遺傳轉(zhuǎn)化高賴氨酸蛋白基因、人乳鐵蛋白基因、人胰島素基因和蜜蜂抗菌肽基因,以期進(jìn)一步提高銀耳的營(yíng)養(yǎng)保健品質(zhì).文獻(xiàn)檢索結(jié)果,從1976年至今,未見(jiàn)銀耳遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究報(bào)道.1建立了銀耳遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng);研究出銀耳遺傳轉(zhuǎn)化的標(biāo)記基因:研究了銀耳、大腸桿菌和農(nóng)桿菌對(duì)13種抗生素的敏感性,篩選出銀耳芽孢敏感

2、的兩種抗菌素--潮霉素、卡那霉素,確定潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt)、新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(nptII)作為銀耳遺傳轉(zhuǎn)化的篩選標(biāo)記基因;測(cè)定了銀耳的β-半乳糖苷酶(lac Z)和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)的活性,確定GUS作為銀耳遺傳轉(zhuǎn)化的報(bào)告基因.通過(guò)誘變,獲得二個(gè)營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株,其中一個(gè)是肌醇缺陷型,可應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記的研究.建立銀耳原生質(zhì)體制備與再生系統(tǒng).研究出2種用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法.研究出3種用芽孢直接轉(zhuǎn)化的方法.2遺傳轉(zhuǎn)

3、化三個(gè)品質(zhì)基因;高賴氨酸蛋白基因(lys):賴氨酸是人體必需氨基酸,也是以大米為主食人群的第一限制性氨基酸,具有重要的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值.人胰島素基因(BCA):胰島素是糖尿病的特效藥,目前主要從動(dòng)物胰腺中提取,基因工程重組人胰島素藥物已開發(fā)成功,并在臨床上應(yīng)用,但生產(chǎn)成本較高.該研究合成了植物密碼子偏好的人胰島素基因(BCA),并從中克隆出人胰島素A鏈、B鏈基因,構(gòu)建了銀耳表達(dá)載體,分別用REMI法、電擊法和PEG法把上述三個(gè)基因?qū)脬y耳芽孢,

4、都得到大量的抗性菌株.蜜蜂抗菌肽基因(AP):抗菌肽具有廣譜抗菌活性、不會(huì)使病菌產(chǎn)生抗藥性,可提高農(nóng)產(chǎn)品的衛(wèi)生品質(zhì),是一類很有前景的肽類抗生素,已引起科學(xué)家們的重視.該研究合成了蜜蜂抗菌肽基因,應(yīng)用LiAc法和PEG法把該基因?qū)脬y耳芽孢,獲得大量抗性菌株,GUS活性檢測(cè)了19個(gè)抗性菌株,其中只有1個(gè)陰性,其它都為陽(yáng)性.PCR檢測(cè)(包括目的基因、GUS基因和Tnos終止子序列)10個(gè)抗性菌株,均為陽(yáng)性.測(cè)定了4個(gè)菌株對(duì)金黃色葡萄球菌的抑