半夏塊莖誘導(dǎo)條件優(yōu)化及其生物堿含量研究.pdf

1、半夏為天南星科半夏屬多年生草本植物，以塊莖入藥。半夏的人工栽培繁殖力較低，再加上半夏常常會(huì)因染病毒而引起其品種質(zhì)量的退化，致使半夏種源常常不能供應(yīng)生產(chǎn)的需求。目前，由于對(duì)半夏塊莖次生代謝方面研究的不足，其塊莖生長(zhǎng)的人工調(diào)控技術(shù)發(fā)展得十分緩慢，致使半夏生產(chǎn)的發(fā)展受到了嚴(yán)重的制約。因此，很有必要進(jìn)行半夏塊莖的相關(guān)研究。
　　經(jīng)過(guò)本研究，得出了以下研究結(jié)果：
　　(1)經(jīng)過(guò)進(jìn)行半夏組織離體培養(yǎng)及植株再生體系的建立這一部分的試驗(yàn)，得

2、出：用MS+6-BA1.0 mgL-1+ IAA0.5 mgL-1培養(yǎng)基可以快速擴(kuò)繁半夏的外植體。半夏外植體用此培養(yǎng)基培養(yǎng)，很快便能在葉柄兩端形成膨大的塊莖，這對(duì)于快速獲得半夏塊莖極有意義。半夏塊莖形成之后，塊莖擴(kuò)增繁殖，并很快開始分化形成葉子。再剪去半夏新長(zhǎng)出的葉子，當(dāng)植株再生長(zhǎng)的時(shí)候，葉子長(zhǎng)得更快更多，根系也得以快速生長(zhǎng)，此方法能夠讓半夏組培苗在短時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)出葉子和根系。本試驗(yàn)后續(xù)進(jìn)行的研究要通過(guò)半夏葉柄誘導(dǎo)形成小塊莖，而此時(shí)培養(yǎng)的半

3、夏組培苗能夠提供足夠的半夏葉柄。因此，進(jìn)行半夏植株再生體系的優(yōu)化研究尤為重要。
　　(2)經(jīng)過(guò)進(jìn)行半夏試管小塊莖的誘導(dǎo)這一部分的試驗(yàn)，得出：用半夏葉柄倒置培養(yǎng)的方式可獲得遺傳穩(wěn)定的未分化狀態(tài)的半夏小塊莖。隨著時(shí)間的積累，半夏試管小塊莖逐漸形成，培養(yǎng)25 d的效果最好，培養(yǎng)30 d時(shí)，半夏試管小塊莖開始分化，長(zhǎng)出白色的根，此時(shí)的小塊莖已不適合作為懸浮培養(yǎng)材料，因此，培養(yǎng)25d的半夏小塊莖是最佳的試驗(yàn)材料。在MS培養(yǎng)基中，半夏葉柄倒置

4、培養(yǎng)，能夠長(zhǎng)出試管小塊莖，同時(shí)葉柄保持綠色，并增粗。而不進(jìn)行倒置培養(yǎng)的半夏葉柄不形成小塊莖，而且葉柄在培養(yǎng)的同時(shí)也會(huì)逐漸枯萎。
　　(3)經(jīng)過(guò)進(jìn)行水楊酸刺激下半夏試管小塊莖懸浮培養(yǎng)體系的建立這一部分的試驗(yàn)，得出：未經(jīng)水楊酸處理的對(duì)照組半夏懸浮塊莖的鮮重、干重隨著時(shí)間的增加而增加，這說(shuō)明半夏懸浮塊莖的生物量是不斷積累的。處理組在0~10d時(shí)，懸浮培養(yǎng)的半夏塊莖的鮮重、干重增長(zhǎng)量均較小，推測(cè)可能是外源添加的水楊酸導(dǎo)致半夏試管塊莖不能很

5、好地適應(yīng)環(huán)境的變化，造成半夏懸浮培養(yǎng)塊莖生長(zhǎng)抑制，導(dǎo)致半夏試管塊莖的鮮重、干重增長(zhǎng)緩慢。由此可知：外源添加的水楊酸對(duì)半夏懸浮塊莖的生長(zhǎng)有一定的影響。
　　(4)經(jīng)過(guò)進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定水楊酸刺激下半夏生物堿的含量這一部分的試驗(yàn)，得出：在流動(dòng)相的選擇中，甲醇∶超純水=5∶95是流動(dòng)相配比中最佳的選擇。在檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇中，254 nm的波長(zhǎng)為其波長(zhǎng)的最佳選擇。通過(guò)使用Agilent1200高效液相色譜儀測(cè)定水楊酸刺激下半夏樣品中鳥苷