馬鈴薯Y病毒弱毒突變體的篩選及其交叉保護(hù)作用.pdf

1、馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)是馬鈴薯Y病毒科、馬鈴薯Y病毒屬的代表種。PVY寄主范圍廣泛，可侵染茄科等多種作物，給馬鈴薯和煙草等作物造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。PVY分離物可分為O株系和N株系，O株系在煙草上引起花葉，N株系可以引起煙草葉脈壞死，對(duì)煙葉生產(chǎn)危害更大。本實(shí)驗(yàn)通過定點(diǎn)突變分析，獲得了含有多位點(diǎn)突變的PVY弱毒突變體，并在其調(diào)控與馬鈴薯X病毒(Potato virus X,PVX)協(xié)生的位點(diǎn)引入突變，獲得了有應(yīng)

2、用潛力的弱毒突變體。具體結(jié)果如下：
　　⑴利用pVYN-605全長cDNA侵染性克隆，構(gòu)建了四個(gè)單位點(diǎn)突變體A(D205G)、B(N339D)、C(K400R)、D(E419D)，接種發(fā)現(xiàn)，與野生型pVYN-605相比，癥狀明顯減輕。將這些位點(diǎn)聚合到一起得到的多位點(diǎn)突變體ABC、ABD、ABCD在煙草上不引起葉脈壞死癥狀，突變體濃度分別降低了25％、38％、47％。
　?、茰y定多位點(diǎn)弱毒突變體的交叉保護(hù)效果。接種多位點(diǎn)突變體

3、ABC、ABD、ABCD于普通煙后，在保護(hù)間隔期15天、20天時(shí)進(jìn)行挑戰(zhàn)接種后沒有觀察到葉脈壞死癥狀。 ELISA檢測病毒的積累量明顯低于野生型，約為野生型積累量的30％。這些結(jié)果表明突變體ABC、ABD、ABCD具有較好的交叉保護(hù)效果。
　?、敲鞔_了調(diào)控PVY與PVX協(xié)生作用的關(guān)鍵氨基酸。將PVY HC-Pro中的FRNK基序突變?yōu)镕INK，NRT基序突變?yōu)锳RT后，HC-Pro喪失了抑制RNA沉默的活性。與野生型HC-Pro不