維氏氣單胞菌滅活疫苗的制備及其免疫保護(hù)效應(yīng)研究.pdf

1、近年來，維氏氣單胞菌導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物感染，并引起大量死亡。目前對(duì)該病的防治主要采取化學(xué)藥物，化學(xué)藥物不但會(huì)對(duì)養(yǎng)殖水體造成破壞。還會(huì)在魚體內(nèi)殘留進(jìn)而影響水產(chǎn)動(dòng)物品質(zhì)。目前，利用疫苗防治細(xì)菌性疾病，不但環(huán)保且很有效，但在國(guó)內(nèi)有關(guān)維氏氣單胞菌滅活疫苗的研究尚未見報(bào)道，為此，本試驗(yàn)對(duì)維氏氣單胞菌及其滅活疫苗進(jìn)行了以下研究:
　　1.維氏氣單胞菌特性及滅活方法研究
　　以維氏氣單胞菌為研究對(duì)象，采用肌肉注射、腹腔注射、皮膚損傷感染和浸泡感

2、染4種方式對(duì)鯽魚進(jìn)行人工感染，肌肉注射和腹腔注射的死亡率最高，分別為100％、80％，說明這兩種感染方式效果最好。用不同的甲醛濃度在不同的溫度下制備滅活疫苗，經(jīng)過無菌和安全性檢驗(yàn)，結(jié)果顯示該菌株使用0.2％的甲醛在28℃條件下滅活24h，不但可以達(dá)到完全滅活的要求，還能最大程度的保護(hù)好免疫原性。在對(duì)鯽魚進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)中，測(cè)得該菌株半致死量為1.6×107(cells)。用4×108cfu/mL菌株進(jìn)行回歸感染試驗(yàn)，白烏鱧的死亡率為10

3、0％，由此表明該菌株具有較強(qiáng)的毒性。
　　2.維氏氣單胞菌滅活疫苗對(duì)鯽魚免疫效應(yīng)研究
　　將制得的疫苗分為全菌組和佐劑組對(duì)鯽魚進(jìn)行免疫，進(jìn)行二次免疫并攻毒。測(cè)定紅白細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞分類百分比、白細(xì)胞吞噬活性、血清抗體效價(jià)和免疫保護(hù)力。結(jié)果顯示全菌組血清抗體效價(jià)在14d是達(dá)第一個(gè)峰值1∶320，經(jīng)過二次免疫后，抗體效價(jià)增加達(dá)1∶640，佐劑組血清抗體效價(jià)在第28d時(shí)達(dá)到峰值1∶1280;攻毒后，佐劑組的免疫保護(hù)力高于全菌組，分別

4、為93.8％、87.5％。紅細(xì)胞數(shù)量變化不大，白細(xì)胞數(shù)量呈上升趨勢(shì);單核細(xì)胞分類比、中性粒細(xì)胞分類百分比、吞噬百分比和吞噬指數(shù)先上升后下降，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);血栓細(xì)胞有一定下降，但是變化不明顯，顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);淋巴細(xì)胞分類百分比總體呈上升趨勢(shì)，與對(duì)照組具有顯著差異性(P＜0.05)。免疫器官指數(shù)有上升趨勢(shì)，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。以上結(jié)果表明維氏氣單胞菌滅活疫苗對(duì)鯽魚具有較好的免疫保護(hù)效果。

5、　　3.維氏氣單胞菌滅活疫苗對(duì)草魚免疫效應(yīng)研究
　　將制得的疫苗對(duì)草魚進(jìn)行免疫試驗(yàn)，分為6個(gè)組，進(jìn)行二次免疫并攻毒。測(cè)定SOD、CAT、AKP活力、白細(xì)胞分類百分比、免疫器官指數(shù)、血清抗體效價(jià)和相對(duì)免疫保護(hù)力。結(jié)果顯示4個(gè)免疫組血清抗體效價(jià)最大值分別為1∶320、1∶640、1∶640、1∶1280，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，相對(duì)免疫保護(hù)力分別為70.59％、76.47％、88.24％、88.24％，與對(duì)照組相比具有顯著差異

6、性(P＜0.05)。三種酶活性在免疫后均出現(xiàn)了增加，在SOD活力方面，佐劑組2顯著高于其余3組（P＜0.05），佐劑組1顯著高于兩個(gè)全菌組(P＜0.05)，全菌組2顯著高于全菌組1(P＜0.05)。在CAT活力方面，佐劑組2顯著高于兩個(gè)全菌組(P＜0.05)，其余免疫組之間不存在顯著差異性(P＞0.05)。在AKP活力方面，佐劑組2顯著高于其余3組(P＜0.05)，全菌組2顯著高于全菌組1和佐劑組1(P＜0.05)，全菌組1和佐劑組1之

7、間不存在顯著差異性(P＞0.05)。單核細(xì)胞分類比和嗜中性粒細(xì)胞百分比先上升后下降，佐劑組2單核細(xì)胞分類百分顯著高于其余各組(P＜0.05)，佐劑組1中性粒細(xì)胞分類百分比顯著高于其余各組（P＜0.05），免疫組與對(duì)照組相比具有顯著差異性（P＜0.05）;血栓細(xì)胞變化不大，淋巴細(xì)胞含量增加顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);免疫器官指數(shù)有上升趨勢(shì)，顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。以上結(jié)果表明維氏氣單胞菌滅活疫苗可以提高草魚的免疫保護(hù)效果，添加