Toll途徑中進化保守信號介導因子(ECSIT)在對蝦抗菌免疫中的功能研究.pdf

1、近年來，對蝦養(yǎng)殖的規(guī)模迅速增加，但對蝦的病害流行卻愈加嚴重。在過去十年中，由病毒和細菌所引起的蝦病給對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成非常嚴重的損失。深入研究對蝦免疫系統(tǒng)可以為對蝦抗病機制和治療方式提供理論依據(jù)。Toll信號途徑在動物先天免疫過程中發(fā)揮著很重要的作用，研究對蝦Toll信號途徑在先天免疫過程中發(fā)揮的作用有助于我們更全面的了解對蝦的先天免疫分子機制，并且可以使我們對無脊椎動物Toll信號途徑有更進一步的認識。
　　ECSIT（Toll途徑

2、進化保守信號介導因子）在哺乳動物Toll途徑和骨形成途徑（BMP途徑）中作為信號介導因子，可以激活下游的激酶，促使核轉錄因子入核。此外，在哺乳動物巨噬細胞線粒體內ECSIT定位于線粒體內膜上，當受到病原刺激時，胞膜上的Toll樣受體激活位于胞內的TRAF6（腫瘤壞死因子受體結合因子6）并轉位到線粒體上，通過與線粒體中的ECSIT蛋白相互作用，促進胞質內和線粒體中活性氧的產生，殺死細菌。然而ECSIT在甲殼類動物中的具體功能還沒有相關報道

3、。本文以日本囊對蝦（Marsupenaeusjaponicus）為研究材料，研究了日本囊對蝦Ecsit基因（MjEcsit1）在抗菌免疫過程中發(fā)揮的作用。首先克隆得到了全長1486bp的MjEcsit1cDNA序列，其完整開放閱讀框含有1221bp堿基對，編碼407個氨基酸。表達模式分析顯示MjEcsit1在不同組織中受到細菌尤其是革蘭氏陽性菌的刺激后表達量顯著升高。使用RNA干擾技術敲低對蝦體內MjEcsit1表達后，對蝦感染金黃色葡

4、萄球菌（Staphylococcusaureus）會導致對蝦體內抑制革蘭氏陽性菌生長的能力減弱，對蝦的死亡率顯著升高。同時，干擾MjEcsit1的表達，會抑制兩種抗脂多糖因子(Alf5，Alf6)類抗菌肽被金黃色葡萄球菌刺激所引發(fā)的上調表達。進一步對這兩種抗脂多糖因子進行功能檢測發(fā)現(xiàn)，它們的重組蛋白可以直接與細菌結合，在對蝦體內分別干擾這兩種抗脂多糖因子的表達會降低對蝦對其體內細菌的清除能力。這些結果表明MjEcsit1在對蝦體內可能通

5、過調節(jié)兩種抗脂多糖因子(Alf5，Alf6)類抗菌肽的表達來參與抗革蘭氏陽性菌的免疫反應。
　　為了鑒定MjEcsit1上游的模式識別受體，分別克隆得到日本囊對蝦中的三種Toll樣受體(MjTLR1，MjTLR2，MjTLR3），分別干擾三種Toll樣受體后，檢測MjEcsit1和兩種抗脂多糖因子Alf5，Alf6的表達發(fā)現(xiàn):抑制MjTLR3的表達會抑制金黃色葡萄球菌的刺激誘導的MjEcsit1和Alf5，Alf6的上調表達。以上