樟子松外生菌根真菌多樣性及菌根生物技術(shù)研究.pdf

1、本研究包括樟子松外生菌根的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)特征分析，外生菌根分子鑒定，外生菌根真菌對樟子松苗木生長的影響，樟子松組培苗菌根化等四部分內(nèi)容，現(xiàn)分述摘要如下：
　?。ㄒ唬┩馍螒B(tài)學(xué)、組織學(xué)特征分析
　　外生菌根中真菌組織形態(tài)學(xué)和解剖學(xué)特征的穩(wěn)定性，為外生菌根的分類鑒定創(chuàng)造了條件和可能性，在進行外生菌根分類鑒定時，重點應(yīng)放在真菌組織的特征上。本研究從樟子松為出發(fā)點，以菌根共生體為研究對象，系統(tǒng)地從形態(tài)學(xué)和解剖學(xué)的角度研究了與之共

2、生的外生菌根類型，詳細(xì)描述了19種外生菌根類型，并根據(jù)圖鑒對所分出的外生菌根的顏色、外部形態(tài)、菌套表面結(jié)構(gòu)及內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)等特征進行了歸納總結(jié)；探索了以宏觀的形態(tài)、顏色和顯微結(jié)構(gòu)中菌套菌絲排列圖式、菌套表面結(jié)構(gòu)及菌絲和菌索內(nèi)部結(jié)構(gòu)等特征為主要依據(jù)進行外生菌根分類鑒定的可行性。
　?。ǘ┩馍夥肿予b定研究
　　本研究在分出基本類型的基礎(chǔ)上，以樟子松的菌根共生體的根尖為材料，提取DNA，利用真菌特有引物ITS1F和ITS4

3、，在PCR基礎(chǔ)上對外生菌根真菌rDNA的ITS區(qū)段進行堿基序列測定，然后與互聯(lián)網(wǎng)上DNA序列數(shù)據(jù)庫中的信息資源進行比較，確定其外生菌根真菌的多樣性。本研究中共分出19個菌根類型，并鑒定科和屬或者到種的水平，鑒定到科水平的有3個類型，鑒定到屬的有1個類型，其余14個類型都鑒定到了種；其中屬于擔(dān)子菌亞門的有15株，子囊菌亞門的有4株。
　　本研究在進行分子鑒定的同時，充分的利用了互聯(lián)網(wǎng)上的生物信息資源，構(gòu)建了分類報告，并對其進行了分析

4、。
　?。ㄈ┩馍婢鷮φ磷铀擅缒旧L的影響
　　本研究在室內(nèi)條件下對樟子松幼苗與點柄乳牛肝菌、褐環(huán)乳牛肝菌、塊菌、絨邊乳菇、黃孢紅菇、蘭絲膜菌、彩色豆馬勃和土生空團菌的菌根人工合成進行了比較全面的試驗研究。通過觀測苗木生長、根系和菌根的發(fā)育、生物量累積，研究了樟子松外生菌根的形成及對苗木生長效應(yīng)的影響，并對樟子松優(yōu)良菌根真菌的篩選進行嘗試。試驗結(jié)果表明:點柄乳牛肝菌與褐環(huán)乳牛肝菌與樟子松根系快速形成菌根，對樟子松幼苗的

5、早期生長有明顯的促進作用，是樟子松菌根化育苗首選的菌根真菌。接種該兩種菌種的樟子松幼苗的平均苗高、地徑、生物累積量均因菌根的形成而明顯增加，生物累積量甚至可達到未接種苗的2～3倍。另外，對樟子松菌根化苗(合成130d)進行了自然干旱脅迫研究，目的是探討菌根化樟子松苗木的抗旱機理。結(jié)果表明，菌根化苗木可以通過提高苗木光合速率、增加苗木根莖比，提高葉片SOD活性、Pro.含量、降低MDA在植物體內(nèi)的積累等多種生理、生化代謝途經(jīng)提高樟子松苗木

6、的抗旱性，其中抗旱性最強的菌種為褐環(huán)乳牛肝菌，其菌根化苗較對照苗臨界致死時間推遲61h。
　?。ㄋ模┙M培苗菌根化
　　本研究以樟子松成熟胚為外植體，研究了不同生長調(diào)節(jié)劑組合對樟子松愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響，并獲得了完整的再生植株。建立了樟子松植株再生體系，確立了樟子松組織培養(yǎng)各階段的最優(yōu)條件：誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基組合為1/2MS+1.5mg?L-12,4-D+0.5mg?L-16-BA；愈傷組織增殖的最佳培養(yǎng)基組合為1/

7、2MS+1.0 mg?L-12,4-D+0.2mg?L-16-BA；愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基組合為1/2MS+0.1mg?L-1IBA+1.0mg?L-16-BA；不定芽伸長生長的適宜培養(yǎng)基為1/2MS＋0.1％活性炭，誘導(dǎo)生根的最佳培養(yǎng)基組合為1/4MS+0.5mg?L-1NAA+0.2mg?L-1IBA。對移栽后樟子松組培苗接種外生菌根真菌S.g和G-S.g，5個月以后，其菌根化率均達到了98%，其菌根侵染率均達到了75%以上，菌根