菠蘿蜜成熟軟化相關(guān)酶基因表達(dá)及β-半乳糖苷酶基因克隆和序列分析.pdf

1、果實(shí)的成熟軟化是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程,與果實(shí)的質(zhì)地品質(zhì)發(fā)育及采后的貯藏運(yùn)輸?shù)榷加兄置芮械年P(guān)系。本研究利用篩選出的內(nèi)參基因,分析了多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因、ɑ-淀粉酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因等12個(gè)基因在干苞菠蘿蜜(GHsj12D and GHsj12G)和濕苞菠蘿蜜(GHsj

2、12As and GHsj12Cs)果實(shí)成熟軟化過(guò)程中的表達(dá),并用RACE技術(shù)克隆到了β-半乳糖苷酶基因cDNA全長(zhǎng),并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,結(jié)果如下:
　　1)分析了5個(gè)內(nèi)參基因在不同菠蘿蜜組織中的表達(dá)穩(wěn)定性,結(jié)果表明,果實(shí)中最穩(wěn)定的3個(gè)內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、18S rRNA;葉片中最穩(wěn)定的3個(gè)內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、β-tubulin;花序中最穩(wěn)定的3個(gè)內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、ɑ-tubulin。

3、>　　2)基因表達(dá)分析結(jié)果顯示,ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因和ɑ-淀粉酶基因可能在菠蘿蜜果實(shí)成熟軟化中起到重要作用,多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因不是導(dǎo)致菠蘿蜜果實(shí)快速成熟軟化的主要基因,其中ɑ-淀粉酶基因和β-淀粉酶基因可能與菠蘿蜜果實(shí)質(zhì)地和品質(zhì)的形成有關(guān)。
　　3)從菠蘿蜜果實(shí)中克隆

4、到β-半乳糖苷酶基因cDNA全長(zhǎng),分析表明,其全長(zhǎng)為3264 bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)2574 bp,編碼857個(gè)氨基酸殘基,編碼蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)分子量95.4538 KD,理論等電點(diǎn)8.88,為堿性蛋白質(zhì);該蛋白屬于糖基水解酶35家族,具有糖基水解酶和半乳糖凝集素等保守結(jié)構(gòu)域,亞細(xì)胞定位于線粒體,具有信號(hào)肽序列和多個(gè)跨膜螺旋區(qū),有19個(gè)功能位點(diǎn)和27個(gè)磷酸化位點(diǎn)(Ser12個(gè),Thr9個(gè),Tyr6個(gè))。二級(jí)結(jié)構(gòu)由ɑ-螺旋、β-折疊、延伸鏈