鯽魚GABAA受體β3亞基基因的克隆與分析.pdf

1、γ-氨基丁酸受體(GABAR)主要存在于脊椎動物和非脊椎動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中，是氟蟲腈、阿維菌素、硫丹和林丹等殺蟲劑的作用靶標，也是治療癲癇、酒精中毒、精神分裂癥與帕金森氏癥等疾病的醫(yī)藥作用靶標，所以受到國內(nèi)外學術(shù)界的高度重視。實驗研究表明阿維菌素、氟蟲腈等農(nóng)藥對魚類等水生生物為高毒，本實驗旨在克隆、純化魚類GABA受體亞基，并結(jié)合生物信息學與化學生物學手段研究其氨基酸序列和立體結(jié)構(gòu)信息。
　　本文運用生物信息學方法在N

2、CBI基因組數(shù)據(jù)庫中找到已經(jīng)公布的GABAA受體β3基因序列，通過多序列同源比對尋找高度保守區(qū)，根據(jù)高度保守區(qū)設計特異性引物，運用RTPCR和RACEPCR技術(shù)，成功地克隆鯽魚(Carassiusauratus)GABAA受體β3基因的全長cDNA序列，并被GenBank收錄(登錄號:KC964110)，該基因長2767bp，開放閱讀框(ORF)為1506bp，編碼502個氨基酸，與已知的其他物種β3亞基具有高度的相似性。通過qRT-P

3、CR擴增檢測到該基因在鯽魚不同組織器官差異性表達。我們以線蟲體內(nèi)對阿維菌素敏感的谷氨酸門控氯離子通道受體蛋白的α亞基(PDBID:3RHW)作為模板，用DS(DiscoveryStudio)模擬鯽魚GABAA受體β3亞基的同源五聚體結(jié)構(gòu)，優(yōu)化結(jié)構(gòu)模型并與農(nóng)藥配體做小分子對接，計算其作用模式和結(jié)合能力。研究魚類GABAA受體β3亞基與農(nóng)藥分子的作用，闡明提高GABA受體拮抗劑類農(nóng)藥對魚類安全性的分子作用機理。為進一步研究GABAA受體β3