基因槍共轉化小麥初探及高代TaCHP轉基因株系的耐鹽堿分析.pdf

1、小麥是世界上最重要的糧食作物之一，土壤鹽堿化嚴重影響了小麥的產(chǎn)量，培育耐鹽堿小麥新品種是解決世界性糧食危機的重要手段。受物種基因庫及傳統(tǒng)雜交技術的限制，小麥新種質(zhì)開發(fā)遇到了困難。植物遺傳轉化在為遺傳育種提供新方向的同時，其潛在的生物安全問題又對轉基因育種工作提出了新的要求。
　　實驗室前期利用小麥莖尖生長點轉化法獲得了耐鹽性增強并能穩(wěn)定遺傳至T4代的TaCHP轉基因株系。本研究在實驗室中通過對T5代TaCHP轉基因株系的分子鑒定，

2、驗證了其遺傳的穩(wěn)定性;比較了在NaCl單鹽處理和鹽堿土中種子萌發(fā)和早期幼苗發(fā)育的差異。比較了種植于東營鹽堿試驗田中的T5代轉基因株系及未轉基因對照，在小麥灌漿期和成熟期相關農(nóng)藝性狀和生理指標，分析了轉基因株系在鹽堿試驗田中增產(chǎn)的主要原因。為避免轉基因載體框架帶來的生物安全問題，采用基因槍共轉化最小線性表達框技術，將耐逆相關轉錄因子TaCHP基因導入小麥幼胚來源的胚性愈傷組織，獲得了可育再生植株。
　　主要研究成果如下:
　　

3、1.構建了psTaCHP載體，通過基因槍共轉化最小線性表達框技術，將TaCHP基因導入幼胚來源的的小麥核生3號、科農(nóng)199、矮抗58等愈傷組織中。經(jīng)Basta篩選和PCR驗證，獲得了5株T0代陽性轉基因植株并已收獲種子。
　　2.實驗室中，對水培處理的T5代TaCHP轉基因株系，進行PCR、RT-PCR、Southernblot等遺傳穩(wěn)定性的分子驗證和耐鹽相關生理指標測定;測定了轉基因株系及對照，在NaCl單鹽處理和鹽堿土處理下種