雞源高遷移率族蛋白B1與J亞群禽白血病病毒復制關系的研究.pdf

1、雞源高遷移率族蛋白Bl與J亞群禽白血病病毒復制關系的研究ResearchonTheRelationshipBetweenChickenHighMobilityGroupB1ProteinandAvianLeukosisVirusSubgroupJReplication研究生：朱明月導師：錢琨副教授秦愛建教授資助項目：國家自然科學基金項目(3l101814)公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項項目(201203055)教育部高等學校博士點基金(20

2、113250120003)江蘇省高校自然科學研究項目(11KJB230003)江蘇省優(yōu)勢學科項目揚州大學二O一四年揚州大學碩士學位論文基因的載體質粒作為標準品，將鑒定正確的chHMGBl基因的T載體質粒進行10倍梯度稀釋，用Real—timePCR方法擴增chHMGBl基因標準曲線，建立絕對定量Real—timePCR方法。并利用建立的方法檢測一日齡雛雞體內組織臟器以及實驗室常用禽源細胞中chHMGBl基因的正常表達水平，從而為進一步研

3、究雞源高遷移率族蛋白B1在家禽疾病免疫調節(jié)和炎癥過程中的生物學作用提供了一種快速、可靠的檢測方法。2ALvJ感染細胞與組織臟器中chHMGB1與病毒基因的動態(tài)變化ALV—J感染禽源CEF、DFl和HDl1細胞，利用熒光定量PCR、間接免疫熒光和WesternBlot實驗檢測感染過程中chHMGBl與病毒基因和蛋白水平的動態(tài)表達情況。熒光定量PCR結果顯示，隨著感染時間增加，不同禽源細胞中ALV—J復制明顯。在病毒感染過程中，DFl細胞中

4、的chHMGBl基因呈現(xiàn)出lh上調，6h下調，12h上調，24h、48h及72h處于下調狀態(tài)，于96h再次上調；CEF細胞中的chHMGBl基因在1h上調，6h下調，12h、24h、48h、72h及96h均呈現(xiàn)上調；HDll細胞中1h與6h處于下調狀態(tài)，12h呈現(xiàn)上調，24h和48h基因下調，72h和96基因上調。間接免疫熒光結果顯示，隨著感染時間增加，病毒熒光逐漸增強，但同時也發(fā)現(xiàn)在不同細胞中，chHMGBl蛋白仍位于胞核中，未岡病毒

5、感染而發(fā)生蛋白遷移變化。WesternBlot檢測細胞中chHMGBl含量結果，與熒光定量PCR檢測結果基本一致。ALVJ感染SPF雞1、28、56、84、112和140日齡腎臟和肝臟組織中的Real—timePCR檢測結果表明，在腎臟中ehHMGBl與病毒基因的變化趨勢基本一致，而在肝組織中chHMGBl基因在28天達到表達的峰值，然后迅速下降維持在正常水平，病毒基因的表達一直處于一個波動的狀態(tài)。ALVJ感染雞外周血單核細胞的Real