沙丁胺醇免疫快速檢測(cè)試紙技術(shù)研究.pdf

1、沙丁胺醇能選擇性激動(dòng)支氣管平滑肌的β-受體，是選擇性β-受體激動(dòng)劑的一種，廣泛用于治療支氣管哮喘。沙丁胺醇等β-興奮劑還可以用作畜禽等的促生長(zhǎng)劑，但是因?yàn)棣?興奮劑易在動(dòng)物臟器中積聚殘留，還會(huì)通過(guò)食物鏈進(jìn)入到人的機(jī)體內(nèi)部，嚴(yán)重影響甚至危害到人類健康，現(xiàn)在已經(jīng)禁止在畜禽生產(chǎn)中將β-興奮劑作為促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的飼料添加劑。“瘦肉精”克倫特羅的濫用引起有關(guān)方面的重視，國(guó)內(nèi)外均已研究出快速有效的檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)，沙丁胺醇作為克倫特羅的代替品具有

2、同樣促生長(zhǎng)效果，而檢測(cè)手段研究相對(duì)滯后，成為不法分子謀取經(jīng)濟(jì)利益的新手段，因此，建立快速、簡(jiǎn)單、方便、有效的檢測(cè)手段是控制沙丁胺醇非法使用的迫切需要。
　　本研究在分析沙丁胺醇免疫學(xué)特性的基礎(chǔ)上，運(yùn)用單克隆抗體技術(shù)制備其單抗，組裝了膠體金試紙和FITC熒光免疫層析試紙，主要研究結(jié)果如下:
　　1.沙丁胺醇人工抗原的制備與鑒定
　　采用混合酸酐法將沙丁胺醇(SAL)偶聯(lián)于載體牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)，合

3、成免疫原SAL-BSA和包被原SAL-OVA，并利用紫外掃描(UV)和SDS-PAGE凝膠電泳進(jìn)行鑒定，紫外掃描圖譜顯示合成的人工抗原的最大吸收峰發(fā)生偏移，證明偶聯(lián)成功，SDS-PAGE結(jié)果表明BSA的泳動(dòng)速度大于SAL-BSA，說(shuō)明SAL-BSA的分子量大丁BSA，進(jìn)一步說(shuō)明SAL與BSA偶聯(lián)成功。
　　2.SAL單克隆抗體的制備及免疫學(xué)特性鑒定
　　用SAL-BSA免疫BALB/C小鼠4只，血清效價(jià)檢測(cè)后選出細(xì)胞融合小鼠

4、1只，將免疫小鼠脾細(xì)胞與NS0瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，運(yùn)用雜交瘤技術(shù)建立了分泌SAL單克隆抗體(mAb)的細(xì)胞株。經(jīng)檢測(cè)、篩選、克隆化后，獲得4D3E7一株特異敏感的雜交瘤細(xì)胞株，用體內(nèi)誘生腹水法制備SAL mAb，經(jīng)鑒定4D3E7對(duì)SAL的IC50為1.35μg/L，與克倫特羅的交叉反應(yīng)率為9.25％，與其他同類物無(wú)交叉反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)制備的SAL mAb可用于SAL殘留檢測(cè)的免疫學(xué)試驗(yàn)。
　　3.沙丁胺醇免疫快速檢測(cè)試紙的研發(fā)