棗外源小麥磷轉運蛋白基因(TaPT2)遺傳轉化研究.pdf

1、棗（Ziziphus jujuba Mill.）原產我國，是我國當今第一大干果樹種。磷素是植物必需的大量營養(yǎng)元素。土壤易出現缺磷現象，磷轉運蛋白是介導植物對磷素吸收和轉運的主體，在調控植株磷素吸收和利用效率中具有重要作用。通過農桿菌介導方法轉化棗，以期獲得可以高效吸收利用磷素的優(yōu)良耐缺磷轉基因植株。本試驗建立了棗葉片不定芽高效再生體系，并實現了根癌農桿菌介導的TaPT2小麥磷轉運蛋白基因基因轉化，獲得了棗轉基因植株。
　　 主要

2、試驗結果如下:
　　 1.建立了棗葉片不定芽高效再生體系。冬棗、月光棗、木棗3個品種葉塊在愈傷誘導培養(yǎng)基MS+麥芽糖20g/L+瓊脂5g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0.1mg/L+ AgNO31.0mg/L上出愈率均可達到100％，差異不顯著。在芽分化培養(yǎng)基MS+蔗糖30g/L+瓊脂5 g/L+6-BA0.8 mg/L+IBA0.2 mg/L上，冬棗和月光棗不定芽出芽率顯著高于木棗，2個品種出芽率均超過了93％，而木棗僅為

3、66.63％。芽分化培養(yǎng)基附加不同GA3、6-BA、TDZ時，不定芽發(fā)生情況差異明顯。附加6-BA的培養(yǎng)基MS+蔗糖30 g/L+瓊脂5 g/L+ IBA0.2 mg/L+6-BA0.8～1.2 mg/L，可防止不定芽玻璃化，每葉塊出芽率和平均出芽數分別可達93.3％和3.53個。此外，乙酰丁香酮100 mg/L可顯著促進冬棗葉塊不定芽發(fā)生，平均出芽數可高達7.30個，當乙酰丁香酮達到200mg/L時，會導致再生不定芽的畸形。
　

4、　 2.確定了棗葉片再生臨界選擇壓。附加除草劑Basta0.4 mg/L時，葉塊不產生不定芽但不會停止分化，可作為葉片再生臨界選擇壓。0.6 mg/L作為莖段生長選擇壓，該系統(tǒng)能有效進行篩選。
　　 3.建立了木棗葉片遺傳轉化體系。適宜的遺傳轉化條件為:葉片切割后針刺處理，預培養(yǎng)1天后，在OD600為0.6～0.8的菌液中侵染5min，在24℃條件下，在培養(yǎng)基MS+瓊脂5g/L+麥芽糖20g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0