白菜種傳黑斑病菌分子鑒定及抑菌藥劑初探.pdf

1、該文以來(lái)自國(guó)內(nèi)外的白菜黑斑病菌為研究材料,進(jìn)行了基本培養(yǎng)條件的比對(duì)研究和5.8s rDNA及其側(cè)翼ITS區(qū)的克隆、測(cè)序、序列變異及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系的分析,建立了白菜黑斑病菌蕓薹鏈格孢(Alternaria brassicae)、甘藍(lán)鏈格孢(A.brassicicola)及蘿卜鏈格孢(A.japonica)三個(gè)種的分子鑒定方法;根據(jù)白菜生產(chǎn)中黑斑病防治的需要,進(jìn)行了14種殺菌劑抑制黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)效果的比較研究.試驗(yàn)獲得到了以下結(jié)果.黑斑病菌

2、及其近緣種真菌核糖體5.8s rDNA及其側(cè)翼ITS區(qū)序列比對(duì)結(jié)果顯示,不同種菌株ITS1比ITS2在堿基構(gòu)成上有更大的變異,而且ITS1的序列長(zhǎng)度變異比ITS2的大:而種內(nèi)雖然各菌株的寄主和地理來(lái)源不同,但I(xiàn)TS1和ITS2在長(zhǎng)度上均沒(méi)有變異,堿基構(gòu)成上存在微小的變異.對(duì)該區(qū)序列的系統(tǒng)聚類(lèi)分析表明,白菜黑斑病菌三個(gè)種雖然地理來(lái)源和寄主不同,但種內(nèi)的不同菌株均在一個(gè)獨(dú)立的聚類(lèi)組中,而且和鏈格孢屬內(nèi)其它種在聚類(lèi)關(guān)系上明顯分開(kāi),可基于該區(qū)進(jìn)

3、行黑斑病菌的分類(lèi)鑒定.設(shè)計(jì)合成了進(jìn)行白菜黑斑病菌三個(gè)種鑒定三對(duì)特異性引物,PCR鑒定檢測(cè)結(jié)果表明:Abre1(AGGCTGAAATCTCTCGAGACGA)和Abre2(AAGGCGAGTCTCCAGCAAACTA)引物對(duì)能特異性擴(kuò)增蕓薹鏈格孢的371bp的片段,Abra1(ACCTCAGCAGCATCTGCTGTTG)和Abra2(GGCTTTATGGATGCTGACCTTG)引物對(duì)能特異性擴(kuò)增甘藍(lán)鏈格孢的457bp片段,Ajap1(

4、AGCAGTGCATTGCTTTACGGCG)和Ajap2(CCAGTAGGCCGGCTGCCAATT)引物對(duì)能特異性擴(kuò)增蘿卜鏈格孢411bp的片段,而且其它近源種未擴(kuò)增出目標(biāo)片段,說(shuō)明這三對(duì)引物可以作為白菜黑斑病菌三個(gè)種鑒定的分子特征標(biāo)記.檢測(cè)表明,PDA是白菜黑斑病菌三個(gè)種5個(gè)菌株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)的最適培養(yǎng)基,菌落直徑可以作為區(qū)分三個(gè)種的參考指標(biāo).白菜黑斑病菌三個(gè)種蕓薹鏈格孢、甘藍(lán)鏈格孢和蘿卜鏈格孢菌株最適生長(zhǎng)溫度20-25℃,甘藍(lán)鏈格孢和

5、蘿卜鏈格孢菌株菌絲生長(zhǎng)溫度和原有報(bào)道相比提高了5℃;蕓薹鏈格孢中國(guó)菌株菌絲生長(zhǎng)pH范圍為4-8,其它所有供試菌株生長(zhǎng)pH為3-11;24h光照、12h光暗交替和24h黑暗對(duì)蕓薹鏈格孢中國(guó)菌株和蘿卜鏈格孢菌株菌絲生長(zhǎng)速率影響不大,其它菌株在24h光照和12h光暗交替下的生長(zhǎng)速率比24h黑暗處理的顯著增大.14種殺菌劑對(duì)白菜黑斑病菌兩個(gè)優(yōu)勢(shì)種蕓薹鏈格孢和甘藍(lán)鏈格孢國(guó)內(nèi)外株系的生長(zhǎng)抑制作用表明:同種但不同來(lái)源的病原菌對(duì)藥劑的敏感性有明顯差異,