干旱脅迫下棉花蛋白質組雙向電泳體系構建與差異表達蛋白功能分析.pdf

1、新疆是我國最大的產棉區(qū),但是地處內陸地區(qū),常年的干旱少雨氣候,嚴重制約了新疆棉花的生長。因此,深入研究棉花的抗旱機理,探求棉花抗旱本質,從而選育出高抗旱的棉花品種是新疆棉花生產中急需解決的問題。傳統(tǒng)的抗旱性研究多集中在核酸水平,很難從根本上揭示棉花的抗旱機制。眾所周知,蛋白質才是生命活動的執(zhí)行者,直接體現各種生命現象。所以,研究干旱脅迫下棉花蛋白質水平的差異性,并結合質譜技術和生物信息學知識,對理解棉花抗旱機理,進而指導棉花抗旱育種具有

2、極其重要的意義。
　　本論文以PEG脅迫處理的苗期棉花為材料,利用雙向電泳技術,研究不同處理條件下棉花葉片蛋白質組的表達差異。將差異明顯的蛋白點進行切割,然后進行肽指紋圖譜鑒定和數據庫比對,結合生物信息學知識分析這些差異蛋白與棉花抗旱性的內在聯系。本研究在蛋白質水平上探求了棉花的抗旱機理,以期為棉花的抗逆研究和培育高抗旱的棉花新品種提供幫助。本論文研究結果如下:
　　1.比較酚法、TCA/丙酮法以及改良的TCA/丙酮法,得出

3、改良的TCA/丙酮法最適合棉花葉片總蛋白質的提取。
　　2.當裂解緩沖液中含有7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4％CHAPS、80mmol/LDTT、1mmol/LPMSF、0.3%載體兩性電解質時,蛋白質樣品得到了很好的溶解。硝酸銀染色法適用于分析膠的制備,而考馬斯亮藍法制備的膠與質譜兼容性較好。當選用24cm,pH4-7的IPG膠條,上樣量為600μg時,得到了質量較高的雙向電泳圖譜。
　　3.將差異明顯的113個蛋