雞傳染性支氣管炎病毒S1基因和M基因二價(jià)核酸疫苗構(gòu)建與免疫效力研究.pdf

1、本研究利用一段編碼(G4S)3多肽的堿基linker將IBV S1和IBV M基因進(jìn)行克隆。免疫熒光結(jié)果表明融合基因能夠在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。
　　 動(dòng)物免疫試驗(yàn)共分6組：M組(免疫IBV M基因真核表達(dá)質(zhì)粒)、S1-M組(PVAX-S1-linker-M融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒)、病毒對(duì)照組V(IBV-Beaudette株)，PBS組，疫苗組，以及1個(gè)空載體對(duì)照組。免疫過(guò)程中利用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、中和抗體試驗(yàn)以及利用

2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，對(duì)不同日齡的試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)，最后用病毒攻擊試驗(yàn)比較免疫不同質(zhì)粒組別之間保護(hù)率。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，4組免疫組各日齡多數(shù)免疫指標(biāo)都高于空載體對(duì)照組和PBS組，對(duì)M組及SIM組比較時(shí)發(fā)現(xiàn)，S1-M組可以較早地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫及體液免疫應(yīng)答。PVAX-S1-linker-M組最為顯著說(shuō)明二價(jià)核酸疫苗對(duì)兩種病毒的攻擊有一定的保護(hù)作用，攻毒后對(duì)各試驗(yàn)組IBV靶器官進(jìn)行了病理組織學(xué)

3、研究，同時(shí)還對(duì)不同免疫組之間的免疫保護(hù)率進(jìn)行了比較，結(jié)果進(jìn)一步證明了PVAX-S1-linker-M能夠很好地提高機(jī)體的免疫保護(hù)能力，抵御病毒感染的能力更為突出，表明在linker幫助下融合基因能夠在機(jī)體內(nèi)更好地發(fā)揮二者的生物學(xué)協(xié)同作用。
　　 綜上，通過(guò)本試驗(yàn)研究表明，IBV抗原S1和M聯(lián)合基因免疫不但能夠促進(jìn)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答能力，而且能夠提高機(jī)體體液免疫應(yīng)答的能力，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力以抵抗病毒的攻擊。本試驗(yàn)結(jié)果為