黃河鯉TCC相關(guān)基因克隆與表達(dá)研究.pdf

1、病原侵染機(jī)體時(shí)，末端補(bǔ)體成分(terminal complement components，TCC)C6、C7、C8a、C8B和C9參與形成膜攻擊復(fù)合物(Membrane attack complex，MAC)，MAC能夠貫穿細(xì)胞膜，最終導(dǎo)致靶細(xì)胞裂解。本文對(duì)黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)TCC相關(guān)基因C8a、C8B和C9基因進(jìn)行了克隆鑒定，使用RT-PCR技

2、術(shù)對(duì)其在黃河鯉不同組織和早期發(fā)育階段的表達(dá)進(jìn)行分析，主要結(jié)果如下：
　　分別使用簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增得到黃河鯉C8a、C8B和C9基因的中間片段，使用RACE擴(kuò)增獲得C8a的cDNA全長(zhǎng)為2066 nt，ORF為1785nt，編碼595個(gè)氨基酸，與斑馬魚(Danio rerio)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)和香魚(Plecoglossus altivelis)C8a蛋白相似性分別為72％、53％和51％；C8B的cDN

3、A全長(zhǎng)為1994 nt，ORF為1716 nt，編碼573個(gè)氨基酸，與斑馬魚、虹鱒、紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)和牙鲆(Paralichthysolivaceus)C8B蛋白相似性分別為75％、61％、58％和56％；C9 cDNA全長(zhǎng)為2155 nt，ORF為2028 nt，編碼675個(gè)氨基酸，黃河鯉C9與草魚(Ctenopharyngodon idella)、斑馬魚、虹鱒和牙鲆C9的氨基酸相似性分別為77％、75

4、％、49％和49％。多序列比對(duì)結(jié)果顯示黃河鯉C8a、C8g和C9存在TCC基因共有的28個(gè)保守的半胱氨酸殘基，結(jié)構(gòu)域搜索顯示黃河鯉C8a、C8B和C9都含有TSP、LDL-R、MACPF和EGPF等保守的結(jié)構(gòu)域。
　　RT-PCR檢測(cè)C8a、C8B和C9轉(zhuǎn)錄本在黃河鯉不同組織和早期發(fā)育階段中的表達(dá)，結(jié)果顯示3個(gè)基因在鰓、肝胰腺、腎臟、脾臟、頭腎、心臟、腸道、腦、肌肉等被檢組織和血液中呈組成型表達(dá)，其中在肝臟中表達(dá)量最高。在黃河鯉早