轉(zhuǎn)pGH基因豬陽性鑒定及外源基因在染色體上定位的研究.pdf

1、為探討睪丸注射法制備轉(zhuǎn)基因豬的高效性，本試驗應用PCR檢測、Southern印跡雜交、熒光定量PCR分析等技術(shù)，檢測通過睪丸注射法制備的第一代轉(zhuǎn)pGH基因豬陽性率。利用FISH雜交技術(shù)研究外源基因在染色體上的具體整合情況，對比外源基因在不同個體基因組中的整合位點與數(shù)目，為轉(zhuǎn)基因動物的定向培育及研究雜交數(shù)目與日增重相互關(guān)系提供依據(jù)。
　　 1.轉(zhuǎn)基因豬陽性率的鑒定
　　 為分析睪丸注射法制備的第一代轉(zhuǎn)pGH基因豬陽性率，本

2、試驗采用PCR檢測、Southern印跡雜交、熒光定量PCR三種方法對其進行陽性鑒定。結(jié)果表明:通過PCR擴增及測序的56頭仔豬中39頭為陽性，死淘8頭中4頭為陽性，則有效陽性率為72.92％(35/48);通過對PCR測序后的陽性個體再進行Southern雜交，陽性率為54.17％;采用PCR定量分析法對16頭陽性個體與16頭同齡非轉(zhuǎn)基因豬進行試驗，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因豬達到閾值所需循環(huán)數(shù)分別為27.5206、27.7039，其中轉(zhuǎn)基

3、因豬mRNA表達量是非轉(zhuǎn)基因豬的1.17倍，表明外源DNA已整合于豬染色體上并能在子代穩(wěn)定遺傳，但不同個體外源基因在體內(nèi)的拷貝數(shù)及表達水平具有差異性。
　　 2.pGH外源基因在染色體上定位研究
　　 為進一步探索通過睪丸注射法制備的F0代轉(zhuǎn)基因豬外源基因在染色體上的整合位點與數(shù)目以及對增重的影響，本試驗采用FISH雜交技術(shù)分析6頭轉(zhuǎn)基因豬與2頭非轉(zhuǎn)基因豬。結(jié)果表明:轉(zhuǎn)基因豬之間及其染色體上雜交信號位置與數(shù)目均不同，雜交