傘滑刃屬線蟲(chóng)分子系統(tǒng)學(xué)研究及八個(gè)新種記述.pdf

1、傘滑刃屬線蟲(chóng)(Bursaphelenchus Fuchs，1937)是一類由昆蟲(chóng)攜播的食菌或植物寄生線蟲(chóng)，目前已報(bào)道近100種，其中松材線蟲(chóng)(B.xylophilus)和椰子紅環(huán)腐線蟲(chóng)(B.cocophilus)是國(guó)際重要檢疫對(duì)象。松材線蟲(chóng)主要通過(guò)木質(zhì)包裝或木材的遠(yuǎn)距離運(yùn)輸傳播，在我國(guó)口岸對(duì)進(jìn)境木質(zhì)包裝檢疫時(shí)，傘滑刃屬線蟲(chóng)種類較多，十分常見(jiàn)。各種傘滑刃線蟲(chóng)——尤其松材線蟲(chóng)及其近似種形態(tài)特征十分相似，鑒定難度很大。本研究對(duì)近年來(lái)寧波口岸從

2、進(jìn)境木質(zhì)包裝中截獲的多種傘滑刃屬線蟲(chóng)。主要是部分新種進(jìn)行了研究，開(kāi)展了M型松材線蟲(chóng)的形態(tài)和分子鑒定特征研究，并對(duì)該屬線蟲(chóng)的ITSPCR-RFLP圖譜、分子系統(tǒng)發(fā)育分析及分組等進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.對(duì)寧波口岸進(jìn)境木質(zhì)包裝中的截獲的8個(gè)傘滑刃屬線蟲(chóng)新種進(jìn)行了較詳細(xì)的記述，分別是非洲傘滑刃線蟲(chóng)(B.africanus sp.n.)(包括2個(gè)亞種)、伯氏傘滑刃線蟲(chóng)(B.burgermeisteri sp.n.

3、)、歐斐切傘滑刃線蟲(chóng)(B.obeche sp.n.)、大尖尾傘滑刃線蟲(chóng)(B.macromucronatus sp.n.)、布拉希傘滑刃線蟲(chóng)(B.braaschae sp.n.)、擬小刺傘滑刃線蟲(chóng)(B.paraparvispicularis sp.n.)以及2個(gè)未發(fā)表種。此外，還對(duì)俄羅斯木質(zhì)包裝中新記錄種楊傘滑刃線蟲(chóng)(B.populi)進(jìn)行了描述。
　　 2.開(kāi)展了M型松材線蟲(chóng)(mucronate form of B.xyloph

4、ilus)形態(tài)和分子鑒定特征研究。將來(lái)自美國(guó)、加拿大以及從進(jìn)境木質(zhì)包裝中截獲的5個(gè)M型松材線蟲(chóng)株系和多個(gè)R型松材線蟲(chóng)(round-tailedform of B.xylophilus)及東亞型和歐洲型擬松材線蟲(chóng)株系進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子鑒定特征比較。發(fā)現(xiàn)這些種類的交合刺形態(tài)相似，M型松材線蟲(chóng)與R型松材線蟲(chóng)的區(qū)別是前者均有明顯的尾尖突，平均長(zhǎng)約2.2-3.0μm，而后者盡管有些個(gè)體有不到2μm的尾尖突(有時(shí)更長(zhǎng))，但群體內(nèi)總有些無(wú)尾尖突的個(gè)體。

5、M型松材線蟲(chóng)與歐洲型擬松材線蟲(chóng)的區(qū)別是尾尖突長(zhǎng)度(平均長(zhǎng)約2.2-3.0μm vs4-5μm)及排泄孔位置(多在中食道球后，有時(shí)在中食道球附近，但從不在中食道球前vs多數(shù)在中食道球附近或更前，偶爾在中食道球后)；與東亞型擬松材線蟲(chóng)的區(qū)別主要是雌蟲(chóng)尾形(尾亞圓柱形尾，尾尖突與尾端縊縮vs尾亞圓錐形，尾尖突與尾幾乎連續(xù)，縊縮不明顯)。通用的5種限制性內(nèi)切酶(RsaⅠ，HaeⅢ，MspⅠ，HinfⅠ和AluⅠ)獲得的M型和R型松材線蟲(chóng)的ITS

6、 PCR-RFLP圖譜完全一致，但用Hpy188Ⅰ和HhaⅠ可以將兩者區(qū)分開(kāi)來(lái)?；贗TS、28S和COI基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析能把R型和M型松材線蟲(chóng)區(qū)分開(kāi)來(lái)，但其遺傳距離很接近。
　　 3.以寧波口岸截獲和培養(yǎng)保存的傘滑刃屬線蟲(chóng)為基礎(chǔ)，綜合Wolfgang等的研究成果，共整理獲得48種傘滑刃屬線蟲(chóng)(包括A，B兩個(gè)未發(fā)表種，B.africanus、B.leoni、B.mucronatus和B.sexdentati各有2種生物型或

7、地理型)的ITS-RFLP圖譜，并對(duì)相應(yīng)的序列進(jìn)行分析，給出了準(zhǔn)確的酶切片段長(zhǎng)度。盡管由于存在ITS區(qū)序列的微不均一性或異質(zhì)性(Microheterogeneity)現(xiàn)象，偶爾會(huì)造成同種線蟲(chóng)ITS-RFLP圖譜的細(xì)微差異，但由于這一現(xiàn)象較罕見(jiàn)(至今僅發(fā)現(xiàn)5種傘滑刃線蟲(chóng)有該現(xiàn)象)，并且都只是其中一種酶切結(jié)果略有差異，因此這對(duì)依據(jù)ITS-RFLP圖譜進(jìn)行種類鑒定影響甚微。研究表明ITS-RFLP圖譜分析不但可以進(jìn)行準(zhǔn)確的種類鑒定，還能對(duì)種內(nèi)

8、的亞種或地理型進(jìn)行進(jìn)一步區(qū)分。
　　 4.通過(guò)對(duì)截獲和保存的傘滑刃屬線蟲(chóng)的測(cè)序以及從GenBank序列下載，進(jìn)行了51種(亞種)的18S、53種(亞種)的ITS和57種(亞種)的28S基因序列的系統(tǒng)發(fā)育研究。發(fā)現(xiàn)B.abruptus位于其他傘滑刃屬群體之外，4條側(cè)線線蟲(chóng)聚類關(guān)系比較清晰，可明顯分為xylophilus組、fungivorus組、africanus組、cocophilus組、kevini組、tokyoensis組和

9、okinawaensis組，但4條側(cè)線的sexdentati組則與2條和3條側(cè)線的種類聚在一起，形成一個(gè)復(fù)雜的大分枝，而sexdentati組和其他多種2條和3條側(cè)線的種類都是由小蠹傳播的。2條側(cè)線與3條側(cè)線的群體親緣關(guān)系較近，分組關(guān)系不清晰，可能是由4條側(cè)線的類群進(jìn)化而來(lái)。本研究以系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系為基礎(chǔ)，依據(jù)傘滑刃屬線蟲(chóng)側(cè)線數(shù)、雄蟲(chóng)尾乳突數(shù)量與排列方式及交合刺形狀。以及雌蟲(chóng)有無(wú)陰門(mén)蓋、后陰子宮囊長(zhǎng)度、雌蟲(chóng)尾部形態(tài)及測(cè)計(jì)值(a，c，c’)等