仿刺參Apostichopus japonicus基因組BAC文庫的構(gòu)建研究.pdf

1、仿刺參(Apostichopus japonicus)是我國北方最重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟物種之一，在我國海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)占據(jù)重要地位?；蚪M大片段文庫是基因組學研究必不可少的基礎(chǔ)工具，基因作圖的先決條件。為了闡明仿刺參基因組的結(jié)構(gòu)與功能，開展基因作圖、圖位克隆重要功能基因、QTL定位，最終實現(xiàn)仿刺參全基因組測序，本研究在系統(tǒng)地摸索并優(yōu)化了BAC文庫構(gòu)建過程中幾個關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)的基礎(chǔ)上，成功構(gòu)建了一個仿刺參細菌人工染色體(Bacterial Art

2、ificialChromosome，BAC)文庫。
　　 1、仿刺參基因組大小的測定
　　 仿刺參基因組大小測定采用流式細胞術(shù)，以雞(Gallus domesticus)紅血細胞DNA含量(2.5pg/2C)為內(nèi)標，用仿刺參(A.japonicus)體腔細胞測定了15只刺參的基因組含量，其C-值為(0.84±0.02)pg，由此得出仿刺參基因組大小為(821.5±19.56)Mb。
　　 2、仿刺參BAC文庫的構(gòu)

3、建及質(zhì)量鑒定
　　 本研究構(gòu)建的仿刺參基因組BAC文庫由單種酶切文庫(MboⅠ文庫)構(gòu)成，目前包括19個384板，總計7，206個克隆。隨機挑取30個BAC克隆進行質(zhì)量鑒定，結(jié)果顯示，MboⅠ文庫平均插入片段大小約為103kb，覆蓋仿刺參基因組0.9倍?；蚪M文庫覆蓋率與基因在文庫中出現(xiàn)的幾率密切相關(guān)，為了確保目的基因在文庫中出現(xiàn)的高概率，擴增庫容的工作正在進行中。同時，對5個隨機BAC克隆的穩(wěn)定性檢測表明，插入DNA片段在大腸