產毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗的研究.pdf

1、豬進行性萎縮性鼻炎(Swineprogressiveatrophicrhinitis，PAR)，主要是由D型產毒素多殺性巴氏桿菌(toxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)引起的豬的呼吸道疾病，該病給養(yǎng)豬業(yè)造成較大經濟損失。
　　 疫苗免疫是預防該病的主要手段，隨著分子生物學的發(fā)展，新型的基因工程疫苗被廣泛用于動物傳染病的預防。本研究以徐引弟博士構建的沙門氏菌缺失株C501為載體，將產毒素多殺性巴氏桿

2、菌toxA基因C端免疫原性片段通過構建重組質粒電轉化C501，獲得產毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗菌株。主要研究內容如下：
　　 1.重組菌株的構建及其生物學特性的研究參照產毒素多殺性巴氏桿菌toxA基因序列(NO.AY864768)，設計引物擴增toxA基因C端，構建無抗性原核表達質粒pYA-toxAc，并電轉沙門氏菌C501，獲得重組菌株C501(pYA-toxAc)。該重組菌株可以穩(wěn)定遺傳表達外源基因片段，且表

3、達產物不影響沙門氏菌自身生長特性、表型及生化特性；重組菌株毒力較親本株C500下降約2倍左右。
　　 2.重組菌株對小鼠的免疫保護效力研究將重組菌株C501(pYA-toxAc)分別通過口服和皮下注射兩種方式免疫小鼠，間隔14天加強免疫一次，第28天分別用豬霍亂沙門氏菌C78-1株10×LD50口服攻毒和產毒素多殺性巴氏桿菌HN-13株5×LD50腹腔攻毒。試驗結果表明，皮下免疫重組菌可以刺激小鼠產生針對沙門氏菌和toxAc較高

4、的IgG抗體和較低的IgA抗體；口服免疫獲得較高的IgA抗體，而IgG抗體較低。無論口服或皮下免疫小鼠均可以對豬霍亂沙門氏菌的攻擊提供100％保護，皮下方式免疫小鼠對產毒巴氏桿菌的攻擊為80％的保護，口服組為60％的保護，對照組80％死亡。
　　 3.重組菌株對豬的免疫試驗選取10頭產毒素多殺性巴氏桿菌與沙門氏菌血清學和病原學均為陰性的斷奶仔豬，隨機分為2組，每組5頭。以3×109CFU/頭的劑量頸部肌肉注射免疫，間隔14天進行