雜交水稻鹽脅迫響應差異蛋白質組分析.pdf

1、以雜交水稻耐鹽型汕優(yōu)10號和鹽敏感型兩優(yōu)培九為實驗材料,通過雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(2-DE)以及基質輔助激光解吸附離子化時間飛行質譜(MALDI-TOF-MS/MS)技術,分別對早期幼苗(10d苗齡)和三葉期(18d苗齡)幼苗在正常和鹽脅迫條件(100mM NaCl)下鹽脅迫響應蛋白質組進行分析、鑒定,得到如下研究結果:
　　 1.將兩種水稻分別播于含清水(對照)和100mM NaCl的發(fā)芽盒中,10d后分別取地上部和根,

2、利用TCA-丙酮沉淀法提取總蛋白。采用17cm線性pH4-7IPG膠條分離地上部和根的總蛋白,經(jīng)PDQuest軟件分析,匹配率均達90％以上。在葉片中,與對照相比,鹽處理后汕優(yōu)10號有25個點明顯上調,兩優(yōu)培九中40個點上調表達,其中15個點在汕優(yōu)10號和兩優(yōu)培九中均上調表達且差異明顯。選取其中6個點進行MALDI-TOF-MS/MS質譜分析,鑒定出2種蛋白質,分別為磷酸丙酮酸水合酶和核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶。在根中,與對照相

3、比,鹽處理后汕優(yōu)10號中有96個點上調,73個點下調,兩優(yōu)培九中有68個上調點,85個下調點。選擇其中11個蛋白點進行質譜鑒定,結果共鑒定出8種蛋白質,包括病程相關的類甜蛋白、推測的類玉米素、推測的球蛋白2S、幾丁質酶、糖苷水解酶、乙二醛酶、谷胱甘肽S-轉移酶、抗壞血酸過氧化物酶。這些蛋白質主要參與碳水化合物和能量代謝的調節(jié),病程調控、有毒物質的清除、抵抗病菌侵染類蛋白、蛋白質的合成與定位等。
　　 2.在水培條件下用100mM

4、 NaCl對18d苗齡的水稻幼苗處理,一周后取地上部,利用TCA-丙酮沉淀法提取地上部總蛋白質,通過17cm線性pH3-10和pH5-8兩個不同區(qū)段IPG膠條分離地上部總蛋白。結果表明兩種水稻的2-DE蛋白表達譜均具有較好的重復性。經(jīng)PDQuest軟件分析,匹配率均達90％以上,與對照相比,在pH3-10區(qū)段中,汕優(yōu)10號中上調2倍以上的點有6個,兩優(yōu)培九中有15個,選取其中9個重復性好且差異明顯蛋白點進行MALDI-TOF-MS/MS

5、分析,鑒定得到3種蛋白質,分別為核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、小分子伴侶GroEL以及磷酸丙糖異構酶。而在pH5-8區(qū)段中,鹽處理后汕優(yōu)10號有37個點上調表達,而兩優(yōu)培九上調表達的點36個,其中有24個點在兩個水稻品種中表達差異較明顯。選擇其中6個進行MALDI-TOF-MS/MS質譜分析,得到3種蛋白質,分別為核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、1個是核糖體再循環(huán)因子、1個核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶激活酶。它們主要是植物參與光