蝗綠僵菌幾丁質(zhì)合成酶家族的功能研究-.pdf

1、隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，有關(guān)昆蟲(chóng)病原真菌致病機(jī)理的研究越來(lái)越深入?；染G僵菌是目前研究比較廣的一類昆蟲(chóng)病原真菌，可以作為研究昆蟲(chóng)病原真菌的模式生物。幾丁質(zhì)是真菌細(xì)胞壁的重要組成部分，幾丁質(zhì)合成的關(guān)鍵酶是幾丁質(zhì)合酶（CHS）。在絲狀真菌中，幾丁質(zhì)合成酶家族基因分為七類。目前，有關(guān)昆蟲(chóng)病原真菌幾丁質(zhì)合成酶家族基因的研究還未見(jiàn)報(bào)道。所以本研究以昆蟲(chóng)病原真菌蝗綠僵菌為研究對(duì)象，研究蝗綠僵菌幾丁質(zhì)合成酶家族基因MaChs，闡明MaChs家

2、族各基因在蝗綠僵菌抗逆和侵染致病過(guò)程中的作用。
　　本研究的主要研究結(jié)果如下:
　?、倩染G僵菌MaChs家族有七個(gè)基因，分別命名為MaChsI、MaChsII、MaChsIII、MaChsIV、MaChsV、MaChsVI、MaChsVII。
　?、谕ㄟ^(guò)qRT-PCR測(cè)定MaChs家族各基因在侵染過(guò)程中的表達(dá)量。除5天蟲(chóng)菌體中MaChsVII表達(dá)量最高，其余各時(shí)期均是MaChsIII相對(duì)表達(dá)量最高，MaChsVI在各時(shí)

3、期相對(duì)表達(dá)量最低；比較同一基因在不同時(shí)期的表達(dá)量，MaChsII在附著胞時(shí)期相對(duì)表達(dá)量最高，其他各基因均在孢子時(shí)期相對(duì)表達(dá)量最高。
　?、墼?/4SDAY固體培養(yǎng)基加入各種逆境，ΔMaChsIII、ΔMaChsV在CR、CFW和H2O2條件下，長(zhǎng)勢(shì)弱于野生型，ΔMaChsVII在CR、CFW、H2O2、SDS、SOR、NaCl逆境及1/4SDAY空白對(duì)照中長(zhǎng)勢(shì)均弱于野生型，其他敲除菌株在逆境下與野生型沒(méi)有差異。敲除MaChsII、

4、MaChsIII、MaChsIV、MaChsV和MaChsVI影響蝗綠僵菌對(duì)濕熱的敏感性，敲除MaChsII、MaChsIV、MaChsVI影響蝗綠僵菌對(duì)紫外的敏感性，ΔMaChsI對(duì)紫外濕熱的敏感性與野生型無(wú)差異。
　?、芊治鯩aChs家族各基因?qū)染G僵菌產(chǎn)孢量和萌發(fā)的影響。結(jié)果顯示，除ΔMaChsI外，其他敲除菌株產(chǎn)孢量均比野生型低，其中ΔMaChsVII產(chǎn)孢量急劇降低。統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率顯示ΔMaChsI、ΔMaChsIV萌發(fā)中時(shí)延

5、遲；ΔMaChsII、ΔMaChsIII、ΔMaChsV萌發(fā)中時(shí)提前，ΔMaChsVI萌發(fā)中時(shí)與野生型相比沒(méi)有顯著差異。
　?、萃ㄟ^(guò)點(diǎn)滴和注射分析各基因敲除后對(duì)蝗綠僵菌毒力的影響。結(jié)果顯示ΔMaChsIII點(diǎn)滴和注射接種蝗蟲(chóng)，毒力均降低。研究發(fā)現(xiàn)，ΔMaChsV注射毒力升高，ΔMaChsVII注射毒力喪失，其余各基因?qū)染G僵菌毒力沒(méi)有影響。
　?、尥ㄟ^(guò)透射電鏡觀察MaChs家族各基因敲除后對(duì)蝗綠僵菌細(xì)胞壁的影響，結(jié)果顯示敲除