番茄斑萎病毒(TSWV)dsRNA介導的分子免疫調控作用研究.pdf

1、番茄斑萎病毒(TSWV)是布尼亞病毒科(Bunuyaviridae)唯一侵染植物的番茄斑萎病毒屬(Tospovirus)的病毒之一。分布于世界各地,對許多作物及植物造成巨大經(jīng)濟損失,加之難以防治。所以本研究主要從dsRNA介導的分子免疫調控方面來研究防治該病毒的方法。
　　 根據(jù)已報道的TSWV基因序列,設計通用引物,通過RT-PCR擴增了TSWV N基因和GN/GC基因的全長序列,并分別克隆到pGEM-T載體上,經(jīng)PCR篩選和

2、酶切鑒定與預期結果一致,對TSWVN基因和GN/GC基因進行測序,經(jīng)過與GeneBank所登錄的其他株系比對后,結果表明,N基因核苷酸序列與來自South Korea的三個株系的N基因核苷酸序列的一致率最高,達99％；GN/GC基因核苷酸序列與來自Spain的兩個株系的GN/GC基因核苷酸序列一致率也高達99％。這說明:本研究中的材料在侵染寄主植物時發(fā)生了基因組重組的現(xiàn)象。
　　 根據(jù)克隆得到的TSWVN基因的序列,設計新的引物

3、,引入需要的限制性內切酶酶切位點(AscI,SwaI,BamHI,SpeI),分別擴增313bp和536bp的片段。用于構建反向重復片段的植物表達載體。擴增N基因反向片段的引物時,在5'端引入限制性酶切位點SpeI,在3'端引入限制性酶切位點BamHI,擴增N基因正向片段時,在5'端引入限制性酶切位點.AscI,在3'端引入限制性酶切位點SwaI,以中間載體pFGC1008自身的一段序列為內含子,構建反向重復dsRNA的載體,以pCAM