沙蔥中黃酮類化合物的分離純化、結構鑒定及其對小鼠免疫抗氧化機能影響的研究.pdf

1、本文通過分離純化沙蔥中的黃酮類化合物，以昆明種小白鼠為動物模型，研究飼喂沙蔥黃酮對機體免疫及抗氧化能力的影響。試驗共分三個部分: 第一部分試驗確定沙蔥黃酮最佳提取純化條件，應用75％乙醇提取沙蔥中黃酮類化合物，提取溫度為70℃、提取時間為2h/2次。應用聚酰胺層析柱分離純化，用30％、50％、70％和95％的乙醇溶液洗脫，用液相色譜-電噴霧離子化-質(zhì)譜串聯(lián)技術(LC-ESI-MS-MS)鑒定沙蔥黃酮的結構，結果如下:30％乙醇洗

2、脫出8種沙蔥黃酮類化合物，分別是①山奈素-4'-O-3,7-O-O-二葡萄糖苷(m/z609)、②槲皮素-7-O-3-O-蕓香糖苷(m/z609)、③山奈素-4'-O-7-O.葡萄糖-3-O-二葡萄糖苷(m/z771)、④7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮醇(m/z329)、⑤3',4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇(m/z327)、⑥槲皮素-7-O-3-O-二葡萄糖苷(m/z625)、⑦槲皮素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m

3、/z463)、⑧山奈素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z447):50％乙醇洗脫出7種沙蔥黃酮類化合物，分別是①木犀草素-5'-O-葡萄糖-4-羥基苯丙酸(m/z593)、②槲皮素-7-O-3-O-蕓香糖苷(m/z609)、③山奈素-4'-O-3,7-O-O.二葡萄糖苷(m/z609)、④7-O-5,4'-二甲氧基-3％羥基黃酮醇(m/z329)、⑤3',4'-環(huán)氧基-7-O-5甲氧基黃酮醇(m/z327)、⑥槲皮素-7-O-3-O-葡

4、萄糖苷(m/z463)；⑦山奈素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z447)；70％乙醇洗脫出3種沙蔥黃酮類化合物，分別是①7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮醇(m/z329)、②3'4',3,4-四羥基-6-O-類黃酮(m/z273)、③3',4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇(m/z327)；95％乙醇洗脫出2種沙蔥黃酮類化合物，分別是①3',4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇(m/z327)、②7-O-5,4'-二甲

5、氧基-3'-羥基黃酮醇(m/z329)。 第二部分試驗應用純昆明種小自鼠480只(體重:20±2g)，隨機分為4組每組120只(雌雄各半)，分籠飼養(yǎng)。第1組為對照組，第2組為添加75.36mg/kg·BW·d沙蔥組，第3組為添加75.36mg/kg·BW·d75％乙醇提取的沙蔥總黃酮粗提物組，根據(jù)預試驗的結果第4組為添加75.36mg/kg·BW·d30％乙醇洗脫純化后沙蔥黃酮添加組，預飼期5d，正式試驗期14d，正式試驗期內(nèi)2

6、次宰殺采血并分離血清，剖離肝臟、胸腺和脾臟稱重。試驗結束時，沙蔥組和沙蔥黃酮純化組的血清T-SOD、GSH-Px含量顯著高于對照組和沙蔥黃酮粗提物組(P<0.05)，沙蔥黃酮純化組和沙蔥黃酮粗提物組的血清CAT含量顯著高于對照組(P<0.05)，試驗各組的血清MDA含量低于對照組，但差異不顯著(P>0.05)，試驗組血清T-AOC含量顯著高于對照組(P<0.05)。試驗組肝臟T-SOD含量顯著高于對照組(P<0.05)，試驗組之間差異不

7、顯著(P>0.05)，沙蔥黃酮純化組的肝臟GSH-Px含量顯著高于其它各組(P<0.05)，對照組、沙蔥組和沙蔥黃酮純化組的肝臟CAT含量顯著高于沙蔥黃酮粗提物組(P<0.05)，沙蔥組和沙蔥黃酮純化組肝臟MDA含量顯著低于對照組和沙蔥黃酮粗提物組(P<0.05)，沙蔥黃酮純化組肝臟T-AOC含量高于其它各組，但差異不顯著(P>0.05)。試驗結果顯示:沙蔥黃酮可提高血清和肝臟中抗氧化酶類的含量和活性，降低體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量，從而

8、提高機體的抗氧化能力。第三部分試驗設計同第二部分，試驗結束時，試驗各組的脾臟指數(shù)高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)，沙蔥黃酮純化組胸腺指數(shù)顯著高于其它各組(P<0.05)；沙蔥黃酮純化組的血清ACP含量顯著高于其它各組(P<0.05),試驗各組肝臟ACP含量顯著高于對照組(P<0.05),試驗各組碳廓清指數(shù)高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)，沙蔥黃酮純化組的吞噬指數(shù)、血清溶菌酶含量顯著高于其它各組(P<0.05);沙蔥黃酮純

9、化組血清IgG含量顯著高于對照組(P<0.05);沙蔥黃酮純化組CD19+細胞數(shù)量高于其它各組，但差異不顯著(P>0.05);沙蔥黃酮純化組CD4+細胞數(shù)量顯著高于對照組和沙蔥組(P<0.05)，對照組CD8+細胞數(shù)量高于其它各組(P>0.05)；試驗組血清NO含量均高于對照組，其中沙蔥黃酮粗提物組顯著高于對照組和沙蔥黃酮純化組(P<0.05)，高于沙蔥組但差異不顯著(P>0.05)。試驗結果顯示:沙蔥黃酮純化組能提高免疫器官指數(shù)、血液

10、和肝臟的ACP和溶菌酶的含量，從而增強吞噬細胞消化和降解異物的能力，并且沙蔥黃酮純化組能顯著提高小鼠的碳廓清指數(shù)(κ)和吞噬系數(shù)(α)，因此沙蔥黃酮在增強機體非特異性免疫機能方面發(fā)揮著重要作用；沙蔥黃酮純化組還可提高小鼠外周血中IgG的含量和CD19+細胞(B細胞)百分率，表明沙蔥黃酮通過增加機體抗體形成細胞的數(shù)量或增強抗體形成細胞的功能，而提高機體體液免疫功能；通過提高外周血中CD4+細胞和CD8+細胞數(shù)量而增強機體的細胞免疫機能。沙