太谷核不育小麥Ms2基因蛋白質(zhì)的表達(dá)差異.pdf

1、本試驗(yàn)以魯麥15為背景的太谷核不育小麥近等基因系（魯麥15，Ms2魯麥15和Rht10+Ms2魯麥15）不同時(shí)期的幼穗為材料，從蛋白質(zhì)組學(xué)角度利用雙向電泳技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)對(duì)太谷核不育基因Ms2的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了研究，得出了以下結(jié)果：
　　 1、經(jīng)多次重復(fù)建立了適用于小麥幼穗蛋白的雙向電泳體系。利用TCA-丙酮提取法提取了供試材料減數(shù)分裂期、單核期、二核期的全蛋白質(zhì)組取得了較好的效果。用PH4-7的24cm線性預(yù)制干膠條對(duì)所提取的

2、蛋白質(zhì)進(jìn)行等電聚焦后，用濃度為12％的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后得到了分離效果較好的電泳圖譜。
　　 2、在PH4-7，分子量10-115KD的范圍內(nèi)，在減數(shù)分裂期得到約500個(gè)蛋白點(diǎn)，單核期、二核期得到600多個(gè)蛋白點(diǎn)。大多數(shù)等電點(diǎn)在PH4.5-7之間，分子量10-80KD之間居多。各個(gè)試驗(yàn)材料的幼穗之間蛋白質(zhì)表達(dá)均存在差異，不同時(shí)期的差異蛋白有所不同，即不同時(shí)期表達(dá)的與育性相關(guān)的蛋白不同。
　　 3、選取差異蛋白點(diǎn)，進(jìn)

3、行膠內(nèi)酶解后進(jìn)行MALDI-TOF-MS進(jìn)行肽指紋圖譜分析。利用Mascot軟件對(duì)SWISSPROT數(shù)據(jù)庫(kù)搜索發(fā)現(xiàn)三個(gè)時(shí)期中共有47個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)得分較高，均在50以上。選取了得分值較低（低于50分）的30個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行了高效液相色譜質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）鑒定，有8個(gè)蛋白點(diǎn)獲得了較好的肽指紋圖譜。
　　 4、鑒定出了與敗育相關(guān)的蛋白：減數(shù)分裂時(shí)期鑒定出的彈性蛋白酶抑制劑和50S核糖體蛋白L6，單核期鑒定出的含TPR重復(fù)的

4、硫氧還原蛋白TTL1，核酮糖1,5二磷酸羧化酶大亞基和ATP合成酶前體；以及二核期鑒定出的磷酸激酶，醌還原酶2和J結(jié)構(gòu)域蛋白是與育性相關(guān)的蛋白。另外，還有一些蛋白可能與育性有關(guān)，減數(shù)分裂期的查爾酮異構(gòu)酶，細(xì)胞周期蛋白依賴性酶抑制因子1；單核期的F-box蛋白、UDP-葡萄糖4差向異構(gòu)酶、GTP結(jié)合蛋白yptV2；二核期的減數(shù)分裂重組蛋白SPO11-2、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab7。
　　 5、對(duì)鑒定出的蛋白