IFN-τ調控奶牛子宮上皮細胞表達MICB及BoLA-A的研究.pdf

1、在正常妊娠過程中胎兒作為一種同種半異體被母體所接受而不出現(xiàn)免疫排斥現(xiàn)象，主要依賴于胎生動物母胎界面細胞上MHC表達情況。MHC-Ⅰ類相關鏈基因(MIC)和牛白細胞抗原A基因(BoLA-A)分別屬于非經(jīng)典和經(jīng)典的MHC-Ⅰ類基因。MICB作為NK細胞激活受體NKG2D的配基，其表達的增強將激活NK細胞的活性；而BoLA-A是目前唯一確定的BoLA-Ⅰ類基因的基因座位，主要功能是表達Ⅰ類分子的α重鏈。研究表明MICB與BoLA-A在動物圍植

2、入期胚胎滋養(yǎng)層細胞中的表達具有時相性，并且其表達的沉默有利于母體識別不排斥胎兒這一妊娠過程的建立。IFN-τ屬于Ⅰ型干擾素，只在反芻動物胚胎圍植入期滋養(yǎng)層細胞表達和分泌，被公認為是反芻動物妊娠識別的信號分子，然而，IFN-τ的受體卻在母體的子宮上皮細胞?；贗FN-τ與MIC和BoLA-A表達的時間和空間上的高度一致性，可以認為其可能存在某種關聯(lián)。研究IFN-τ對奶牛子宮內膜上皮細胞MICB和BoLA-A表達的調控作用，并藉此進一步探討

3、奶牛妊娠圍植入期BoLA-I參與的妊娠免疫調控的分子機制具有指導意義。
　　 本試驗以健康的荷斯坦奶牛子宮為材料，運用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)子宮內膜上皮細胞，建立了奶牛子宮上皮細胞的高效體外培養(yǎng)方法。采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞，細胞長勢良好、形態(tài)密度正常。作為原代細胞，我們可以對其繼代培養(yǎng)，多次試驗表明在繼代培養(yǎng)到第八代之前細胞形態(tài)良好可以用于本次試驗，第八代之后細胞出現(xiàn)衰老凋亡現(xiàn)象，為保證試驗結果不予采用。
　　 設置奶牛子宮

4、上皮細胞密度5×105個/mL作為IFN-τ對MIC和BoLA-A表達干預試驗的模型。不同的干預濃度(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)和干預時間(3h、6h、12h)的外源性IFN-τ對子宮上皮細胞作用后，采用實時熒光定量PCR檢測IFN-τ對奶牛子宮上皮細胞MICB和BoLA-A表達的調控作用。結果顯示，IFN-τ對奶牛子宮內膜上皮細胞MICB和BoLA-A的表達具有顯著調控作用。在3h～6h內，IFN-τ對子宮上

5、皮細胞MICB表達具有明顯的抑制作用(P<0.01)；12h后其抑制作用減弱，MICB的表達水平與未添加IFN-τ的試驗對照組差異不顯著(P>0.05)。IFN-τ對子宮上皮細胞BoLA-A表達在3～6h內具有明顯的抑制作用(P<0.01)；但在12h后，BoLA-A的表達水平顯著高于未添加IFN-τ的試驗對照組(P<0.01)。IFN-τ對MICB和BolA-A表達水平的抑制作用在不同濃度(50ng/mL、100ng/mL、200ng