兩種三葉草雜交胚離體培養(yǎng)與F-,1-代擴繁及其鑒定.pdf

1、缺乏優(yōu)良豆科牧草的蛋白質供應和固氮作用，是內蒙古等地區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展和草地土壤改良的關鍵限制因素之一。本研究選擇具有抗旱、耐寒、但固氮能力差的六倍體高加索三葉草與內蒙古大興安嶺野生型固氮能力強、質量好的四倍體白三葉進行遠緣雜交，以期獲得具有兩種牧草雜種優(yōu)勢的高產、抗旱、固氮能力強的雜種F1三葉草。由于兩種三葉草雜交后出現雜種胚敗育，因此采用人工雜交后對胚離體培養(yǎng)來挽救胚敗育。本試驗以高加索三葉草與白三葉雜交后胚離體培養(yǎng)產生F1無菌苗的莖段為

2、外植體，篩選誘導愈傷組織合適培養(yǎng)基，將F1莖段產生的愈傷組織再繼代培養(yǎng)，然后轉移到分化培養(yǎng)基，研究不同濃度激素組合對體細胞胚胎發(fā)生的影響，并對F1進行細胞學和同工酶標記研究，鑒定雜交后代的真實性。主要結果如下： 1.MS+6—BA（2mg/L）+NAA（0.8mg/L）是誘導F1莖段愈傷組織的適宜培養(yǎng)基；MS+2，4—D（0.25mg/L）+6—BA（0.5mg/L）+NAA（0.25mg/L）+KT（0.5mg/L）+CH（2

3、50mg/L）為F1莖段愈傷組織的適宜分化培養(yǎng)基。 2.對分化后的胚性愈傷組織進行組織學觀察，可見其表面形成許多瘤狀突起，這些瘤狀突起即為胚性細胞團，它們可以繼續(xù)發(fā)育形成體細胞胚胎發(fā)生過程。 3.雜種F1無菌苗莖段在MS+2，4—D（0.25mg/L）+6—BA（2mg/L）和MS+2，4—D（0.1mg/L）+6—BA（2mg/L）培養(yǎng)基中出現器官發(fā)生現象。 4.對雜種F1體細胞染色體數目進行了統(tǒng)計，確定其染色