黑龍江省野生黑木耳菌種的ISSR指紋分析及SCAR標記.pdf

1、黑龍江省野生木耳菌種資源豐富，所以如何客觀評價黑龍江地區(qū)黑木耳野生菌株種質資源的遺傳多樣性，通過掌握不同的野生菌株的鑒別方法，這用于充分保護和利用野生黑木耳種質資源，對開展黑木耳的良種選育，保護黑木耳品種知識產權，加強黑木耳菌種質量管理的基礎十分重要。本研究利用從黑龍江省各地收集的24個野生黑木耳菌株及一個栽培菌種，應用DNA標記技術（ISSR，SCAR）對此進行了野生黑木耳菌種的分子指紋分析。主要研究結果如下：
　　 1.24

2、個供試野生黑木耳菌種來源均來自野外采集，本實驗采用菌種分離的方法，將生長于木段上的野生黑木耳，經多步分離和培養(yǎng)，以及出耳實驗等方法，證明分離得到的菌株是純的野生黑木耳菌株。
　　 2.在對擴增體系進行正交優(yōu)化的基礎上，應用篩選出能擴增出穩(wěn)定性和可重復性高，而且多態(tài)性豐富的帶型的10個多態(tài)性引物對24個野生木耳菌株以及一個對照栽培黑木耳菌株黑29，進行基因組PCR擴增，總共產生88條DNA帶，其中多態(tài)性條帶為83條，呈現(xiàn)94.3％

3、的多態(tài)性，平均每個引物擴增出8.8條帶。從88條DNA帶中選擇32個最佳的ISSR標記譜帶，構建了25個供試菌株的ISSR指紋圖譜模式圖，并將其計算機化。試驗表明ISSR標-記技術可以快速、靈敏、準確地應用于黑木耳栽培菌株的鑒別。
　　 3.對于ISSR擴增結果進行分析后獲得了4個菌株的5條特異性條帶，將其中分別來自的供試大興安嶺翠峰菌株（引物P12）和方正菌種（引物P24）的2條特異性條帶，通過回收克隆并測序，應用軟件Prim

4、erPremier5.0設計SCAR標記引物對，成功地將它們轉化為SCAR標記，用于對菌株大興安嶺翠峰和方正進行特異性鑒定。這些SCAR標記的建立，為黑木耳野生菌株的鑒定提供了準確可靠和迅捷方便的新途徑。
　　 4.經ISSR的DNA指紋分析結果表明，在一定相似水平上，25個菌株可聚為四大類：第一大類野生菌株主要來自伊春地區(qū)以及加格達奇地區(qū)采集的木耳野生菌種；第二大類的菌種主要是來自大興安嶺，加格達奇，亞布力牡丹江等地區(qū)等周邊地

5、區(qū)的采集的野生木耳菌種；第三大類則是木耳對比的栽培菌種黑木耳29號。第四類為單一的來自大興安嶺翠峰采集的野生木耳菌種。該結果一方面表明我國野生黑木耳菌種在同一地區(qū)內的親緣相似度較高，如伊春南岔與伊春嘉蔭，加格達奇二號與加格達奇三號，另一方面可能因為區(qū)域面積太大而采集的地點不同，有的采集自同一片區(qū)域的野生菌種的親緣關系相差較遠如加格達奇三號與加格達奇一號之間親緣關系就相差較遠。再次栽培菌種可能是因為馴化和栽培的關系與采集的野生菌種的親緣相