犢牛體外胚胎生產技術的初步研究.pdf

1、為了建立高效的犢牛體外胚胎生產技術，本研究通過比較不同超數排卵方案、不同月齡犢牛、重復超排對荷斯坦奶牛犢牛超數排卵效果的影響；對超排獲得的犢牛卵母細胞和成年母牛卵母細胞的體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育潛能進行了比較；同時探討了采卵時間（最后一次FSH到手術采卵之間的時間間隔）對犢牛卵母細胞回收率及卵母細胞質量的影響；并對犢牛卵母細胞體外成熟和胚胎體外培養(yǎng)進行了初步探討。
　　 (1)采用5種超數排卵方案處理同月齡犢牛，結果發(fā)現

2、：(FSH)25mg/頭，次，肌注一天兩次，間隔12h，連續(xù)注射4天，最后一次FSH隔24h采卵的超排方案，所得頭均采集卵泡數（97.3+23.5個）和頭均可用卵數（43.7+-9.7枚）顯著高于其他方案（P<0.05）。對比1～6月齡犢牛的超數排卵效果，結果發(fā)現2～6月齡犢牛組之間的頭均采集卵泡數和可用卵數差異不顯著（P<0.05），2～5月齡犢牛組頭均采集卵泡數和可用卵數均顯著高于1月齡組(P<0．05)，6月齡犢牛組與1月齡組之間

3、差異不顯著(P>O.05)。分析了重復超數排卵間隔時間對犢牛第二次超排效果的影響，發(fā)現第二次超排的頭均采集卵泡數和可用卵數均顯著低于第一次(P0.05），但均顯著高于間隔2周組(P<0.05)。
　　 (2)4種超排方案所回收犢牛卵母細胞的體外成熟率和受精后卵裂率差異不顯著(P>O.05)。2～6月齡之間犢牛卵母細胞體外成熟率和受精后卵裂率差異不顯

4、著（P<0.05）。無論是來自于不同超排方案還是不同月齡的犢牛卵母細胞的體外成熟率、受精后卵裂率和胚胎體外發(fā)育能力均顯著低于成年牛（P<0.05）。
　　 (3)采卵時間為間隔30h時，犢牛卵母細胞的回收率和成熟率顯著高于間隔24h組(P<0.05)，極顯著高于間隔18h組（P<0.01）；但可用卵率顯著低于間隔24h組和18h組（P<0.05）。
　　 (4)用成熟液M1（TCM-199+5mmol/L Hepes+0

5、.51ag/mL FSH+5μg/mL LH+llag/mL17-β-E2+15％ FBS）對犢牛卵母細胞進行體外成熟培養(yǎng)24h，卵母細胞的成熟率和受精后的卵裂率均顯著高于M和M2成熟液組(P<0.05)。
　　 (5)犢牛胚胎從體外受精后到囊胚孵化所需的時間顯著比成年牛長（13.4+1.1天vs8.2+0.8天，P<0.05）。犢牛孵化囊胚的直徑顯著小于成年牛(276.3+4-35.lμm vs472.8士81.6μm，P<0