石榴愈傷組織的誘導(dǎo)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的建立.pdf

1、本文以石榴（Punica granatum L）植株為材料，利用植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，以誘導(dǎo)愈傷組織和建立石榴愈傷組織懸浮培養(yǎng)體系為目的，系統(tǒng)地對(duì)石榴愈傷組織的誘導(dǎo)和狀態(tài)調(diào)控、分化了的疏松愈傷組織顆粒懸浮培養(yǎng)體系的特點(diǎn)和生長(zhǎng)規(guī)律等幾個(gè)方面進(jìn)行研究。使用分光光度法測(cè)量石榴不同來源組織的黃酮類化合物含量，為工廠化生產(chǎn)黃酮類化合物提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　 愈傷組織的誘導(dǎo)階段，研究了不同外植體類型、不同滅菌條件、不同激素種類和水平對(duì)

2、石榴愈傷組織誘導(dǎo)率、疏松程度和褐化率的影響。結(jié)果表明：靠近頂端的成熟葉片更容易誘導(dǎo)為疏松愈傷組織，體積分?jǐn)?shù)為75％酒精消毒5s和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的升汞消毒4min組合的消毒效果較好，石榴愈傷的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素配方為：MS+1.0 mg/L2.4-D+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。
　　 石榴愈傷組織的繼代過程中，出現(xiàn)愈傷組織生長(zhǎng)過于致密，不利于實(shí)現(xiàn)懸浮培養(yǎng)，因此獲得疏松、生長(zhǎng)快速的愈傷組織是成功實(shí)現(xiàn)石榴細(xì)胞懸

3、浮培養(yǎng)的前提。研究不同激素種類和水平對(duì)疏松愈傷組織的影響。結(jié)果表明石榴最佳繼代培養(yǎng)配方為：MS+1.0mg/L2，4-D+0.1mg/LKT。同時(shí)確定了石榴愈傷組織在36天的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)曲線，傷組織在這個(gè)培養(yǎng)階段內(nèi)，呈現(xiàn)出“S”型生長(zhǎng)周期，第12d進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在培養(yǎng)的第30d，達(dá)到細(xì)胞生物量的最大值，為6.48g，增長(zhǎng)了5.34倍。
　　 建立石榴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系，研究接種量、搖床轉(zhuǎn)速、蔗糖濃度、裝液量、激素配方、培養(yǎng)過程中pH

4、的變化等因素對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的影響。同時(shí)還對(duì)懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)曲線的測(cè)定和黃酮類化合物的積累做了部分研究。
　　 本文得出石榴細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的最佳條件如下：以MS基本培養(yǎng)基的成分和含量為標(biāo)準(zhǔn)，配制成液體培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)蔗糖濃度為3％，即30g/L，培養(yǎng)瓶的裝液量為25mL/150mL，每瓶接種3g愈傷組織，以110rpm的搖床轉(zhuǎn)速，最佳激素配方為：MS+1.0mg/L2，4-D+0.1 mg/L KT。在以上條件下進(jìn)行培養(yǎng)，懸浮

5、細(xì)胞在6d后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在21d細(xì)胞生物量達(dá)到最大值，干重達(dá)到21.68g/L。21d后細(xì)胞生物量開始下降，進(jìn)入生長(zhǎng)靜止期，次級(jí)生物代謝產(chǎn)物細(xì)胞總黃酮含量在此階段出現(xiàn)高峰值，含量為69.05mg/g。在培養(yǎng)過程中pH值有變化，先降低，后有升高趨勢(shì)。
　　 用分光光度法，對(duì)定期采收的石榴皮、石榴葉和固體培養(yǎng)中的石榴愈傷組織、液體培養(yǎng)中的細(xì)胞，測(cè)量其總黃酮含量，并分析在不同時(shí)間的變化趨勢(shì)。結(jié)果表明：石榴皮的總黃酮含量隨時(shí)間變化而