養(yǎng)殖鰻鱺病原菌快速診斷試劑盒研制及其應(yīng)用.pdf

1、鰻鱺俗稱鰻魚,是名貴經(jīng)濟魚類之一,目前中國鰻鱺養(yǎng)殖產(chǎn)量居世界首位,主要養(yǎng)殖種類為歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla(Ldnnaeus))和日本鰻鱺(Anguilla japonica(Temminck etSchlegel)),美洲鰻鱺(Anguilla rostrata(Lesueur))也在某些地區(qū)開始試養(yǎng)。在養(yǎng)殖過程中,各種疾病不斷發(fā)生,其中細菌性疾病造成的危害最大。但是,目前對鰻鱺病原菌的現(xiàn)場快速檢測的試劑盒研究很少,

2、尚無行之有效的方法。本研究利用新制備的10株病原菌的免疫血清和實驗室以前研制的23種免疫血清組成快速診斷試劑盒,并用此試劑盒對鰻魚主養(yǎng)區(qū)福建省和廣東省的不同地區(qū)、不同時間、不同規(guī)格的鰻鱺所患病原菌進行現(xiàn)場快速檢測。結(jié)果如下：
　　 ⑴應(yīng)用本實驗室分離得到的10株病原菌免疫注射新西蘭大白兔,獲得了免疫血清效價達1024及以上有8種;1種血清效價為512;1種血清效價為256。
　　 ⑵將10種免疫血清與本實驗室分離得到29

3、株病原菌(包括制備免疫血清的10株病原菌)進行玻片凝集交叉反應(yīng),結(jié)果顯示:沒有交叉反應(yīng)的免疫血清7種,有交叉反應(yīng)的免疫血清3種,交叉菌株的數(shù)量分別為1、2和4株,交叉菌株的凝集效價與制備血清菌株的凝集效價比值最高為1/2,最低為1/8。
　　 ⑶用HiTrap Protein A HP親和層析柱在AKTApurifire-100蛋白純化儀器上純化了有交叉反應(yīng)的3種血清,純化后,用純化前后血清蛋白含量的比值計算出回收率,同時用純化

4、前后的比活力的比值計算出純化倍數(shù),結(jié)果顯示:樣品純化后,最高回收率為30％,最低回收率為7.5％,最高純化倍數(shù)為85,最低純化倍數(shù)3.1。并且通過純化,3種血清與29株病原菌的玻片凝集試驗無出現(xiàn)明顯的交叉反應(yīng)。
　　 ⑷利用可檢測33種鰻鱺病原菌的快速診斷試劑盒在福建省四個地區(qū)(閩東、閩南、閩西、閩北)及廣東省臺山市對不同時間、不同地區(qū)、不同種類的鰻鱺病原菌進行現(xiàn)場快速檢測,結(jié)果顯示:福建省歐洲鰻鱺在4～6月和8～10月這兩個時

5、間段過檢測到12株病原菌,其中4～6月檢測到9株,8～10月檢測到10株,有6株病原菌不能同時存在于兩個時間段,說明不同時間鰻鱺所感染的病原菌不同。對于歐洲鰻鱺,在4～6月份,共檢測了三個地區(qū),檢測到9株病原菌,僅僅有一株病原菌可以在三個地區(qū)同時出現(xiàn);在8～10月,共檢測了四個地區(qū),檢測到9株病原菌,有兩株病原菌在四個地區(qū)同時出現(xiàn);說明在同一時間內(nèi)不同地區(qū)的病原菌是有差別的。8～10月對廣東省臺山市日本鰻鱺進行檢測,檢測到5株病原菌,其