cDNA-AFLP技術(shù)分離桂花香氣相關(guān)基因.pdf

1、桂花(Osmanthus Fragrans)是木犀科木犀屬的代表種，是優(yōu)良的園林綠化樹種和香花樹種。 本研究以桂花的花蕾為材料，運(yùn)用cDNA-AFLP技術(shù)，分離桂花花香形成過(guò)程中差異片段，通過(guò)克隆測(cè)序，BLAST分析，獲得的6個(gè)可能與香味相關(guān)的基因片段，為下一步揭示桂花香味物質(zhì)代謝途徑奠定基礎(chǔ)，希望為花卉香味的遺傳改良提供一條新途徑，主要試驗(yàn)結(jié)果如下： 1建立適合桂花花蕾總RNA的提取技術(shù)體系 采用改良熱硼酸法，

2、改良 Tris-硼酸法，試劑盒提取桂花花蕾總RNA，比較結(jié)果顯示試劑盒法提取的總KNA，條帶完整，質(zhì)量好，純度高，適合開展試驗(yàn)。 2利用cDNA-AFLP技術(shù)分離桂花花香形成過(guò)程中差異基因 采用末端兩個(gè)選擇性堿基的16條EcoRⅠ引物和16條MseⅠ進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，共256對(duì)引物組，通過(guò)篩選，確定160對(duì)引物組進(jìn)行擴(kuò)增。試驗(yàn)共回收差異條帶100帶，獲得50條測(cè)序結(jié)果。在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，發(fā)現(xiàn)有31條序列

3、在nr庫(kù)中搜索到相似性較高的基因。另外17條序列沒有搜索到同源序列，推測(cè)為未知基因。分析顯示31個(gè)TDFs中6個(gè)TDFs可能與植物香氣成分相關(guān)，分別命名為20Gox2，C4H1，CCD4，AACT，CFAT，LOX。 3采用RT-PCR技術(shù)分離CFAT和LOX的3'端序列 選取其中兩個(gè)可能與桂花香氣相關(guān)基因片段CFAT和LOX，設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增其3'端序列，分別進(jìn)行克隆、測(cè)序和拼接，獲得了CFAT3'末