對(duì)蝦白斑綜合癥病毒極早期基因的研究.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是困擾對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)最主要的病原體，目前人們對(duì)它的侵染機(jī)制還缺乏了解。本研究在建立WSSV體外感染模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用蛋白質(zhì)合成抑制劑來(lái)阻斷病毒早期、后期基因的轉(zhuǎn)錄，然后通過(guò)基因芯片的方法篩選病毒的極早期基因，共獲得了27個(gè)在極早期樣品中特異表達(dá)的陽(yáng)性探針，其中包括了24個(gè)候選的極早期基因(>100aa)。通過(guò)RT-PCR方法以及轉(zhuǎn)錄時(shí)相分析對(duì)這些候選基因進(jìn)行驗(yàn)證，最終鑒定了16個(gè)WSSV的極早期基因(包括一個(gè)已

2、知的極早期基因/e/)，其中12個(gè)基因在WSSV基因組中呈基因簇分布。進(jìn)一步分析表明WSSV的極早期基因編碼了至少3類(lèi)調(diào)控因子：包括4個(gè)具有轉(zhuǎn)錄激活能力的核蛋白WSV051，WSV069，WSV079，WSV100;1個(gè)細(xì)胞核內(nèi)的蛋白激酶WSV083，以及1個(gè)定位于核膜與中心體上的泛素連接酶E3，WSV249。這些極早期蛋白可能通轉(zhuǎn)錄調(diào)控，翻譯后修飾等方式對(duì)病毒的復(fù)制以及宿主細(xì)胞進(jìn)行精密的調(diào)控，對(duì)它們的進(jìn)一步研究將有助于揭示W(wǎng)SSV的感

3、染機(jī)制，建立有效的防治方法。 此外，由于DNA病毒極早期基因啟動(dòng)子是基因工程中強(qiáng)啟動(dòng)子的良好來(lái)源，本研究還對(duì)WSSV極早期基因的啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行了克隆分析，并檢驗(yàn)了它們啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的能力。結(jié)果表明wsv051，wsv069，wsv083，wsv108，wsv249的啟動(dòng)子在在昆蟲(chóng)細(xì)胞表現(xiàn)出很強(qiáng)的活性；而wsv249的啟動(dòng)子還可以在螯蝦原代細(xì)胞中啟動(dòng)基因表達(dá)。因此這些啟動(dòng)子在構(gòu)建基因工程表達(dá)載體，特別是適用于蝦類(lèi)的表達(dá)載體上有一定的應(yīng)