正交設計法優(yōu)選蒲桃中總黃酮的提取工藝研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p>　　正交設計法優(yōu)選蒲桃中總黃酮的提取工藝研究</p><p>　二級學院中藥學院</p><p>　專 業(yè)中藥學（中藥分析鑒定方向）</p><p>　班 級2011級（3）班</p><p>　學生姓名馮珊娜<

2、/p><p>　學 號1106503304</p><p>　指導教師何洋</p><p>　2015年 4 月</p><p><b>　　誠 信 聲 明</b></p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設計）是本人在老師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標

3、注和致謝的地方外，論文（設計）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。我承諾，論文（設計）中的所有內容均真實、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文（設計）作者（簽名）： </p><p>　　年 月 日</p><p><b>　　目 錄</b>

4、</p><p><b>　　摘要Ⅰ-Ⅱ</b></p><p><b>　　1前言1</b></p><p><b>　　2儀器與材料3</b></p><p><b>　　2.1儀器3</b></p><p>　　2.2

5、 藥材與試劑3</p><p><b>　　3 方法4</b></p><p>　　3.1 蒲桃總黃酮含量測定方法4</p><p>　　3.2 方法學考察4</p><p>　　3.3 單因素考察方法5</p><p>　　3.4 蒲桃中總黃酮提取的正交試驗6</p>

6、<p><b>　　4結果6</b></p><p>　　4.1方法學考察結果6</p><p>　　4.2單因素考察結果9</p><p>　　4.3蒲桃總黃酮提取的正交試驗優(yōu)選結果12</p><p><b>　　5討論13</b></p><p>　

7、　5.1最大吸收波長的選擇：13</p><p>　　5.2提取條件影響程度分析13</p><p>　　5.3顯色反應分析14</p><p><b>　　6結論14</b></p><p><b>　　參考文獻15</b></p><p><b>　　

8、綜述17</b></p><p><b>　　致謝24</b></p><p>　　正交設計法優(yōu)選蒲桃中總黃酮的提取工藝研究</p><p>　　摘要：目的 利用正交設計法優(yōu)選蒲桃中總黃酮的提取工藝。方法 以蘆丁為對照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，用紫外分光光度法在510nm波長處測定總黃酮的含量。采用L9(34)正

9、交實驗設計，以蒲桃中總黃酮含量為考察指標，考察乙醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度4個因素對蒲桃中總黃酮的提取的影響。結果 蒲桃中總黃酮的最佳提取工藝為60%乙醇，70倍量，80℃，回流提取2h。結論 經(jīng)試驗證明，該提取工藝重復性好，結果準確可靠，易于操作，便于推廣，對進一步的工藝開發(fā)和蒲桃中總黃酮的研究有較好的參考價值。</p><p>　　關鍵詞：蒲桃；總黃酮；正交實驗；紫外-可見分光光度法</p>

10、;<p>　　Study on Extraction Technology of Total Flavonoids in Syzygium jambos (L.) Alston by Orthogonal Design</p><p>　　Abstract: Objective To optimize extraction technology of total flavonoids in Syzy

11、gium jambos (L.) Alston. Methods The ultraviolet spectrophotometry method was used to measure the total flavonoids content in ethanol extract of Syzygium jambos (L.) Alston with different polar solvent extraction, with s

12、odium nitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxide as color reagent and the rutin as standard substance and the maximum absorption wave-length of 510nm. By L9(34) orthogonal experimental design, with Sy</p><p>

13、　　Key words: Syzygium jambos (L.) Alston; total flavonoids; orthogonal experiment; UV-Vis spectrophotometry </p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　蒲桃(Syzygium jambos (L.) Alston)為桃金娘科蒲桃屬常綠喬木

14、[1]，收載于《廣東省中藥材標準》(第一冊)，又有名稱為水蒲桃、響鼓、鈴鐺果、風鼓和香果等，有此名稱，是因為其果實到成熟季節(jié)，會散發(fā)如玫瑰般的清新香味，同時果核可在果腔內隨意滾動，搖動起來有響聲。蒲桃原產(chǎn)于馬來群島、印度及我國的海南省，集中分布在亞洲熱帶地區(qū)，也有分布在亞洲亞熱帶至溫帶，以及大洋洲的部分地區(qū)。蒲桃在我國現(xiàn)在主要分布于海南、臺灣、廣東、廣西、福建、云南和貴州等地區(qū)，大半處于半野生狀態(tài)[2]。蒲桃多生長在陰濕之地，喜光喜陰，

15、喜溫暖濕潤的氣候，因此常生長在小溪邊或者低濕的溝谷里；耐肥沃耐澇，不耐貧瘠干旱，因此濕潤且肥沃的土壤較適宜其生長。蒲桃作用繁多，來源廣泛，資源甚多，且價廉易得。蒲桃的根系發(fā)達，且生長情況較好，因此具備強抗風性，同時還具有抗二氧化硫、抗氯氣、抗機動車尾氣、抗粉塵等功能，常用于園林綠化、防護植物。民間有將其采摘鮮食，有將其用于釀酒，有將其曬干制成涼茶。而在藥用方面，其作用也是不容小覷的，蒲桃的藥用部位包括葉、干燥莖、種子、花和果實。據(jù)相關資

16、料研究記載，蒲桃葉和花搗爛可以用來</p><p>　　黃酮類化合物是廣泛存在于自然界的一大類天然有機化合物，是植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物，是在體內主要由莽草酸途徑和乙酸-丙二酸途徑生物合成的一類產(chǎn)物。目前，黃酮類化合物泛指兩個苯環(huán)通過三個碳原子相互聯(lián)結形成的一系列化合物，它分布廣泛，主要存在于高等植物及羊齒植物的根、莖、葉、花、果實等中，其中以被子植物分布最多。黃酮類化合物在植物體內大半以與

17、糖結合成為苷類的形式存在，少部分以游離形式存在。黃酮類化合物具有許多重要的生理、生化作用——清除生物體內的自由基，具有抗氧化作用[12]，具有抗腫瘤、調血脂、抑制血小板聚集、抗動脈粥樣硬化、抗骨質疏松等各種作用[13-16]。黃酮類化合物的這些生理活性在抗衰老和預防治療人類的腫瘤、心血管病等疾病這些方面具備重要意義。</p><p>　　正交設計法是研究多因素多水平的一種設計方法，是試驗優(yōu)化的一種常用技術。正交設

18、計法建立在概率論、數(shù)量統(tǒng)計之上，運用排列整齊的正交表安排試驗方案，再經(jīng)過綜合比較和對試驗結果的統(tǒng)計分析，達到減少試驗次數(shù)而能快速獲得最優(yōu)試驗方案的目的。正交設計法設計簡單可行，數(shù)據(jù)點分布均勻，可減少不必要的人力物力財力等資源的浪費，在現(xiàn)代制備工藝和提取工藝的研究中應用廣泛[17]。</p><p>　　在對蒲桃的研究中，與生理特性、栽培技術、引種情況、物種比較等方面相關的比較多，雖然已有文獻報道了蒲桃屬植物中總黃

19、酮的提取工藝研究，但其中以蒲桃葉居多，具體到蒲桃莖提取工藝優(yōu)化研究仍是甚少。張亮亮[18]等人研究確定了海南蒲桃葉中黃酮的最佳提取條件為：乙醇體積分數(shù)70%，料液比1:20，提取溫度80℃，提取時間3h。由此可將其結果作為參考，對蒲桃莖中總黃酮的提取條件進行更進一步的研究。蒲桃在我國資源量巨大，用途眾多，是值得大力開發(fā)的植物資源，且中草藥的具體化學成分提取、研究與應用日益受到重視，國內外開發(fā)中草藥植物的力度也在不斷加大。</p&g

20、t;<p>　　近年來，植物藥以其天然低毒、來源豐富的特點倍受青睞，而黃酮類化合物更是以其廣譜的生理、藥理作用引人矚目。因此，以黃酮類化合物為活性成分的植物藥的開發(fā)、研究和加工越發(fā)受到科學家們的重視。作為石岐涼茶的成分之一的蒲桃，目前仍非常少以藥物的身份出現(xiàn)在市面上，由此可見，隨著該相關技術的日趨成熟，蒲桃中的黃酮類化合物的開發(fā)利用更具有廣闊的前景。</p><p>　　綜上所述，蒲桃在我國資源豐富

21、，藥用層面利用卻較少，本次實驗研究可確定蒲桃莖中總黃酮的最佳提取條件，為科學研究蒲桃莖的藥理作用、研發(fā)蒲桃相關藥物新劑型、推廣蒲桃藥物的生產(chǎn)等提供可靠的數(shù)據(jù)。有效的提取方式是進行其他深層研究的先決條件，本次研究有助于更進一步對蒲桃各相關資源進行開發(fā)利用。</p><p><b>　　2 儀器與材料</b></p><p>　　2.1 儀器

22、 </p><p><b>　　2.2 藥材與試劑</b></p><p><b>　　3 方法</b></p><p>　　3.1 蒲桃總黃酮含量測定方法</p><p>　　3.1.1 對照品溶液的的制備</p><p>　　取蘆丁對照品6mg

23、，精密稱定，置于20mL容量瓶，加70%乙醇溶液適量，振搖使其溶解，用70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液Ⅰ，蘆丁濃度為0.3080mg/mL。同法配制對照品儲備液Ⅱ，蘆丁濃度為2.920mg/mL。</p><p>　　3.1.2 供試品溶液的制備</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精密稱定，加70%乙醇溶液70mL，加熱回流提取2h，提取液趁熱過濾，濾液蒸

24、干，殘渣加70%乙醇溶液溶解，轉移至25mL量瓶中，加70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。</p><p><b>　　3.2 方法學考察</b></p><p>　　3.2.1 線性關系考察</p><p>　　精密量取對照品儲備液I0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mL，分別置于10mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.5m

25、L，6min后，加入10%硝酸鋁0.5mL，6min后，再加入4%氫氧化鈉5mL，加入70%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置15min，作為對照品系列溶液，以不含蘆丁的空白溶液為參比，于510nm波長處測定吸光度，以對照品濃度(X)為橫坐標，相應對照品吸光度(Y)為縱坐標，繪制濃度-吸光度標準曲線。</p><p>　　3.2.2 精密度試驗</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0

26、g，精密稱定，按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液，精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，重復6次，分別測定其吸光度，計算吸光度的RSD。</p><p>　　3.2.3 穩(wěn)定性試驗</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精密稱定，按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液，精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，分別在0、0

27、.5、1.0、1.5、2.0和2.5h時，測定其吸光度，計算吸光度的RSD。</p><p>　　3.2.4 重復性試驗</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精密稱定，按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液6份，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮含量的平均值和RSD。</p><p>　　3.2.5

28、 加樣回收率試驗</p><p>　　取已知含量的供試品粉末(總黃酮的含量為5.888mg/g)9份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入對照品儲備液Ⅱ0.5、1.0和1.5mL，按“3.1.2”項下方法操作，制備供試品溶液，每個濃度3份，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮的平均回收率和RSD。</p><p>　　3.2.6 樣品含量測定&

29、lt;/p><p>　　取3個不同批次，每批次三份的蒲桃粉末（過三號篩）共9份，每份1.0g，精密稱定，按“3.1.2”項下方法操作，制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度值，計算每批次蒲桃中總黃酮的含量及其RSD。</p><p>　　3.3 單因素考察方法</p><p>　　3.3.1 乙醇濃度對提取的影響<

30、/p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精確稱定，共5份，分別加入50%、60%、70%、80%和90%乙醇溶液，按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮的含量，繪制相關折線圖。</p><p>　　3.3.2 提取時間對提取的影響</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)

31、1.0g，精確稱定，共5份，分別加入70%乙醇溶液50mL，加熱回流提取時間分別為1.0、1.5、2.0、2.5和3.0h，其余操作按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮的含量，繪制相關折線圖。</p><p>　　3.3.3 料液比對提取的影響</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精確

32、稱定，共5份，分別加入70%乙醇溶液50mL、60mL、70mL、80mL和90mL，其余操作按“3.1.2”項下方法，制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮的含量，繪制相關折線圖。</p><p>　　3.3.4 提取溫度對提取的影響</p><p>　　取蒲桃粉末(過三號篩)1.0g，精確稱定，共5份，按“3.1.2”項下方

33、法操作，提取溫度分別設在60℃、70℃、80℃和90℃，制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液2mL，按“3.2.1”項下方法操作，測定其吸光度，計算總黃酮的含量，繪制相關折線圖。</p><p>　　3.4 蒲桃中總黃酮提取的正交試驗</p><p>　　根據(jù)蒲桃總黃酮的性質，考察了乙醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度4個因素，并結合以上單因素試驗結果，設置4因素3水平正交試驗見表1，根

34、據(jù)因素水平表，以蒲桃總黃酮含量為評價指標，按L9(34)正交表進行實驗。正交試驗數(shù)據(jù)處理采用正交試驗直觀分析法，統(tǒng)計不同水平下提取出蒲桃中總黃酮含量的平均含量，以極差R進行分析。</p><p>　　表1 正交優(yōu)選因素水平</p><p><b>　　4 結果</b></p><p>　　4.1 方法學考察結果</p><p

35、>　　4.1.1 標準曲線的建立</p><p>　　對照品溶液于510nm波長處測定吸光度結果見表2，以對照品濃度(X)為橫</p><p>　　坐標，相應對照品吸光度值(Y)為縱坐標，繪制而成的標準曲線的回歸方程為</p><p>　　Y=9.600×10-3X-1.030×10-2(r=0.9998)(r>0.9990)，見圖1

36、。結果表明，蘆丁在15.40～77.00μg/mL濃度范圍內與吸光度呈良好線性關系。</p><p>　　表2 蒲桃總黃酮標準曲線測定結果</p><p>　　圖1 含量測定標準曲線</p><p>　　4.1.2 儀器精密度試驗結果</p><p>　　試驗結果見表3，吸光度的RSD為0.12%。結果表明，所使用儀器精密度良好。</p

37、><p>　　表3 儀器精密度試驗結果（n=6）</p><p>　　4.1.3 穩(wěn)定性試驗結果</p><p>　　試驗結果見表4，吸光度的RSD為0.48%。結果表明，此樣品于室溫條件下放置2.5h內穩(wěn)定。</p><p>　　表4 穩(wěn)定性試驗結果（n=6）</p><p>　　4.1.4 重復性試驗結果</p&

38、gt;<p>　　試驗結果見表5，吸光度的RSD為0.77%。結果表明，此方法重復性良好。</p><p>　　表5 重復性試驗結果（n=6）</p><p>　　4.1.5 加樣回收率試驗結果</p><p>　　試驗結果見表6，計算得出總黃酮的平均回收率為99.4%，RSD為1.4%。符合分析要求。</p><p>　　表6

39、 加樣回收率試驗結果 (n=3)</p><p>　　4.1.6 樣品含量測定結果</p><p>　　試驗結果見表7，3個不同批次的RSD分別為0.55%、0.49%、1.1%，符合分析要求。</p><p>　　表7 樣品含量測定結果 (n=3)</p><p>　　4.2 單因素考察結果</p><p>　　4.

40、2.1 乙醇濃度影響考察結果</p><p>　　考察結果見表8，圖2，蒲桃總黃酮提取含量隨溶劑濃度增加而變化，60%～70%乙醇溶液提取出的總黃酮含量最大。</p><p>　　表8 乙醇濃度的選擇</p><p>　　圖2 乙醇濃度對提取的影響</p><p>　　4.2.2 提取時間影響考察結果</p><p>

41、　　考察結果見表9，圖3，其他因素不變，隨著時間的延長，蒲桃總黃酮的提取率逐漸增加，1.5h～2.5h為蒲桃總黃酮的最佳提取時間范圍。</p><p>　　表9 提取時間的選擇</p><p>　　圖3 提取時間對提取的影響</p><p>　　4.2.3 料液比影響考察結果</p><p>　　考察結果見表10，圖4，料液比對蒲桃總黃酮的提

42、取效率的影響隨著提取溶劑體積的變化而變化，1:60～1:80為蒲桃總黃酮最佳提取料液比范圍。</p><p>　　表10 料液比的選擇</p><p>　　圖4 料液比對提取的影響</p><p>　　4.2.4 提取溫度影響考察結果</p><p>　　考察結果見表11，圖5，隨著提取溫度的升高，蒲桃總黃酮的提取率逐漸增加，70℃～90℃為

43、蒲桃總黃酮的最佳提取溫度范圍。</p><p>　　表11 提取溫度的選擇</p><p>　　圖5 提取溫度對提取的影響</p><p>　　4.3 蒲桃總黃酮提取的正交試驗優(yōu)選結果</p><p>　　根據(jù)蒲桃總黃酮的性質，考察了乙醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度4個因素，并結合以上單因素試驗結果，設置4因素3水平正交試驗見表1，根據(jù)因

44、素水平表，以蒲桃總黃酮含量為評價指標，按L9(34)正交表進行實驗。正交試驗數(shù)據(jù)處理采用正交試驗直觀分析法，統(tǒng)計不同水平下提取出蒲桃總黃酮含量的平均含量，以極差R進行分析，結果見表12。</p><p>　　表12 正交試驗結果分析</p><p>　　極差R的結果表明，乙醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度4因素對蒲桃總黃酮提取含量的影響的顯著性為：提取溫度＞乙醇濃度＞提取時間＞料液比。蒲

45、桃總黃酮加熱回流提取的最優(yōu)水平搭配為A1B2C2D2，即乙醇濃度為60%，提取時間為2h，料液比1:70，提取溫度80℃為蒲桃中總黃酮的最佳提取工藝。在此條件下進行驗證試驗，重復試驗值為6.499mg/g，RSD為0.35%，符合預測值，說明該方法優(yōu)選出來的工藝條件準確可靠。</p><p><b>　　5 討論</b></p><p>　　5.1 最大吸收波長的選擇

46、：</p><p>　　取對照品溶液經(jīng)顯色處理后，以不含蘆丁的空白溶液為參比，將待測液盛于比色皿中，置于比色池中，在200～600nm波長段掃描測定最大吸收度，結果顯示，對照品及供試品均在510nm處有最大吸收，故選擇510nm為測定波長。</p><p>　　5.2 提取條件影響程度分析</p><p>　　5.2.1 溶劑濃度的影響</p><

47、;p>　　提取黃酮類化合物的乙醇液濃度一般在60%～95%之間，60%左右濃度的乙醇溶液適合提取黃酮苷類，90%～95%的乙醇溶度適于提取游離黃酮。故本次實驗中采取了50%、60%、70%、80%、90%五個梯度濃度，由實驗中可看出隨著乙醇濃度的上升，提取出來的黃酮量先上升后下降。實驗中所出現(xiàn)的乙醇液濃度增大導致黃酮提取量減小的現(xiàn)象，可能是因為存在部分醇溶性雜質有關。隨著乙醇液濃度增大，這部分雜質溶出率也增大，與黃酮類化合物競爭，

48、并且和乙醇-水分子進行結合，使得黃酮類化合物溶出減少。</p><p>　　5.2.2 提取時間的影響</p><p>　　由實驗結果可看出，隨著提取時間的延長，總黃酮的提取量呈現(xiàn)先陡然上升后平緩上升的趨勢，從2h后總黃酮的提取量增加量微乎其微，提取率趨于穩(wěn)定。綜合耗時長短、經(jīng)濟利益、資源耗費量等多方面因素，可確定1.5h～2.5h為理想的提取時間范圍。</p><p&

49、gt;　　5.2.3 料液比的影響</p><p>　　料液比，指固態(tài)的“料”的質量與作為浸提液的“液”的體積的比。本次實驗中料液比的單位為g/mL，蒲桃總黃酮的提取率隨著所用提取溶劑體積的增大先增大后減小，料液比太大時，可能由于乙醇濃度大而產(chǎn)生如“5.2.1”項中所述情況，導致黃酮溶出率減小。</p><p>　　5.2.4 提取溫度的影響</p><p>　　將

50、提取溫度的考察區(qū)間設置為60～90℃。單因素考察結果顯示，一定范圍內提高溫度，可以促進蒲桃中總黃酮溶出，在此區(qū)間內，提取率與溫度成正比。</p><p>　　5.3 顯色反應分析</p><p>　　本實驗利用紫外分光光度法測定總黃酮過程中，采用比色法，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，在提取液中加入亞硝酸鈉與硝酸鋁后,亞硝酸鈉起還原作用，被還原的黃酮類化合物再與鋁鹽生成絡和物,最后加

51、入氫氧化鈉溶液，生成2’-羥基查耳酮使提取液顯色,從而可在510nm波長處出現(xiàn)吸收峰，進行含量測定。這種顯色的化合物不穩(wěn)定,在實驗操作中可以明顯感受到這個特性，因此，實際操作中，應該安排好實驗步驟與操作時間，盡量在相同實驗條件、相同環(huán)境條件下，且在短時間內快速測出吸光度,這樣才能保證結果的準確度. </p><p><b>　　6 結論</b></p><p>　　本

52、實驗采用乙醇液加熱回流提取方法對蒲桃中的總黃酮進行提取，選用蘆丁作為對照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，用紫外分光光度法在510nm處測定所提取的總黃酮的含量。</p><p>　　實驗中采用L9(34)正交實驗設計，以蒲桃中總黃酮含量為考察指標，考察乙　　醇濃度、提取時間、料液比、提取溫度4個因素對提取的影響，結果可看出4個因素對蒲桃總黃酮提取含量的影響的顯著性為：提取溫度＞乙醇濃度＞提取時間＞料液比

53、。由正交設計法優(yōu)選出來的蒲桃總黃酮加熱回流提取最佳提取條件為：乙醇濃度為60%，提取時間為2h，料液比1:70，提取溫度80℃。該方法優(yōu)選出來的工藝簡單易操作，穩(wěn)定性好，經(jīng)濟可行，便于推廣使用。在實際生產(chǎn)中，同時也要考慮溶劑消耗，濃縮回收溶劑的耗能等因素，根據(jù)實際情況適當調整工藝。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 中國科學院《

54、中國植物志》編輯委員會.中國植物志：第五十三卷：第一分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　冊[M].北京:科學出版社，1984：68.</p><p>　　[2] 杜華波.熱帶亞熱帶果樹——蒲桃[J].中國熱帶農業(yè)，2006，（02）：43.　　　　　　　　　　　　　</p><p>　　[3] 陳定如.水翁、海南蒲桃、蒲桃、洋蒲桃[J].廣東園林，2007，29（3）：　　　　　　　　

55、　　　　　79-80.</p><p>　　[4] 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標準:第一冊[M].廣州：廣東科技出版社，2004：200.</p><p>　　[5] 溫放，梁桂友.蒲桃[J].廣西植物研究所，2012,（04）：155.</p><p>　　[6] 方奇南.亞熱帶優(yōu)樹種——蒲桃[J].福建熱作科技,1992,（03-04）：48.<

56、;/p><p>　　[7] Djipa CD,Delmee M, Quetin-Leclercq J. Antimicrobial activity of bark extracts of Syzygium jambos(L.)alston (Myrtaceae)[J].Ethnopharmacol, 2000，71(1/2):307.</p><p>　　[8] Murugan S,Devi

57、 P,Parameswari NK,etal. Antimicrobial activity of Syzygium jambos against pathogens[J].Int J Pharm Sci,2011,3（2）：44.</p><p>　　[9] Avila-Pena D,Pena N,Quintero L,etal.Antinociceptive activity of Syzygium jamb

58、os leaves extract on rats [J].J Ethnopharmacol,2007, 112（2）：380.</p><p>　　[10] 鄧家剛，李學堅，覃振林.蒲桃仁提取物降血糖作用的實驗研究[J].廣西植物，2006, 26（2）：214.</p><p>　　[11] Jayasinghe L,Ratnayake RM,Medawala MM,etal.Dihy

59、drochalcones with radical scavenging properties from the leaves of Syzygium jambos[J].Nat Prod Res,2007,21（6）：551.</p><p>　　[12] 張永忠，陳學穎，孫艷梅.四種異黃酮抗氧化活性的比較研究[J].食品科學，2008，（02）：383-386.</p><p>　　[

60、13] 延璽，劉會青，鄒永青，等.黃酮類化合物生理活性及合成研究進展[J].有機化學，2008，28（09）：1534-1544.</p><p>　　[14] 楊志峰，朱英，李珊珊.植物黃酮的抗腫瘤作用及構效關系的研究進展[J].四川中醫(yī)，2011，29（9）：35-38.</p><p>　　[15] 張齊雄，施倫勇，劉衍李，等.黃酮類稀土配合物抗骨質疏松癥應用展望[J].時針國醫(yī)醫(yī)藥

61、，2012，23（06）：1503-1504.</p><p>　　[16] 田景梅，張揚，張云峰，等.黃酮類調節(jié)脂肪平衡與降低心血管疾病發(fā)生機制的研究進展[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（09）：5259-5351.</p><p>　　[17] 劉靜.正交設計法在藥物制備工藝研究中的應用[J].齊魯藥事，2011，（11）：668-669.</p><p>

62、　　[18] 張亮亮，陳茄鴻,汪詠梅，等.海南蒲桃葉黃酮的提取及抗氧化性研究[J].生物質化學工程，2010，44（2）：27-30.</p><p><b>　　綜述</b></p><p>　　蒲桃中總黃酮的研究價值</p><p><b>　　1蒲桃的基本信息</b></p><p>　　蒲桃

63、屬桃金娘科蒲桃屬，為常綠喬木或小喬木。別名有水蒲桃、香果、響鼓、風鼓和鈴鐺果。蒲桃原產(chǎn)于印度、馬來群島和菲律賓等地，在我國的栽種歷史頗為悠久。蒲桃集中分布在亞洲亞熱帶，我國境內主要包括海南、廣東、廣西、福建、云南等地。蒲桃喜溫暖多濕的氣候，喜光耐陰；喜濕潤，常生長在溪邊或溝谷低濕的地方，耐陰濕耐澇，不耐干旱，比較適宜生長在肥沃濕潤的酸性土壤或沖積土上[1-3]。蒲桃具有多領域作用——可制成果膏、果餞；可研制成為花茶；其果實、種子、莖葉均

64、可入藥，是沙溪涼茶的主要成分之一，有抗菌[4，5]、抗炎[6]、降血糖[7]和抗氧化[8]等作用；其次還可用于園林綠化或作為觀賞植物[2]。</p><p><b>　　2蒲桃的化學成分</b></p><p><b>　　2.1揮發(fā)油類</b></p><p>　　蒲桃揮發(fā)油的化學成分在不同部位中存在差異，蒲桃莖中主要為

65、酸類化合物，而花葉中為單萜、倍半萜、及其二者的氧化物。其中蒲桃葉中含量最高的成分為丁香烯-5-醇，而花莖中的揮發(fā)油主成分均為十六酸[9]。</p><p><b>　　2.2黃酮類</b></p><p>　　羅濟文[10]使用破碳電極，pH值為4.0的磷酸鹽緩沖溶液，差分脈沖法對蒲桃葉中的蘆丁含量進行測定，測得蘆丁質量分數(shù)為15.7mg/g，另外采用分光光度法測得的

66、黃酮質量分數(shù)為24.5mg/g。</p><p><b>　　2.3三萜類化合物</b></p><p>　　林大都[11]在蒲桃莖化學成分研究中，分離得到6個三萜酸類化合物，對其進行薄層鑒別分析后，結果找到5個對應斑點（除了麥珠子酸），并且結果表明蒲桃莖乙酸乙酯提取物的主成分之一是三萜酸類化合物。</p><p>　　此外，蒲桃中還有其他化學

67、成分，如鞣酸類，以及其他含量較少的成分。</p><p><b>　　3蒲桃的藥理作用</b></p><p><b>　　3.1抗氧化</b></p><p>　　張鏡、刁樹平[12]對海南蒲桃果實中的原花青素進行體外抗氧化活性的相關藥理研究，通過分析研究海南蒲桃原花青素分別對DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基和

68、亞油酸脂質過氧化半抑制劑量，得出海南蒲桃原花青素總抗氧化、還原力明顯高于VC、金屬離子螯合力高于EDTA的結論。由此表明海南蒲桃原花青素具有較強的清除自由基與抗氧化活性等體外生物活性。</p><p><b>　　3.2降血糖</b></p><p>　　邱雪蓮[7]等人用海南蒲桃籽提取物以不同劑量連續(xù)15d對自發(fā)性2型糖尿病KK/4pj-Ay/J小鼠灌胃給藥，結果試

69、驗組小鼠的空腹血糖和糖耐量得到顯著改善，而對小鼠體重影響不大。</p><p>　　3.3抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛</p><p>　　Djipa CD[4]等人采用瓊脂稀釋法對蒲桃樹皮提取物的抗菌活性進行體外測試，他們研究發(fā)現(xiàn)蒲桃樹皮提取物對于抑制金黃色葡萄球菌尤其有效，對凝固酶陰性葡萄球菌也有一定作用，由此證明了蒲桃樹皮提取物具有抗菌活性。</p><p>　　D. &

70、#193;vila-Peña, N. Peña[6]等人對實驗小鼠進行皮下注射，通過熱板試驗、福爾馬林試驗和握力試驗，分別評估蒲桃提取物對熱刺激性皮膚疼痛、炎癥性皮膚疼痛和肌肉疼痛的鎮(zhèn)痛效果，研究證明蒲桃提取物能對皮膚疼痛產(chǎn)生一個持久的鎮(zhèn)痛效果，可媲美于嗎啡。對炎癥性皮膚疼痛，其療效高于抗炎藥雙氯芬酸。在對抗肌肉疼痛方面，正常情況下并沒有明顯改變，但對于炎癥引起的肌肉疼痛，蒲桃提取物可顯著降低肌肉痛覺敏感度。由此表明

71、了蒲桃提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用。</p><p><b>　　4蒲桃的用途</b></p><p><b>　　4.1食用</b></p><p>　　蒲桃果實為核果狀漿果。果肉呈白色，味酸甜，水分較少，可供鮮食、制果膏果醬、制蜜餞等，果汁經(jīng)發(fā)酵后還可制成飲料。此外，蒲桃始花期為2月，盛花期5月份，6月底為末期，但7月

72、到12月仍保持開放少量花。可見蒲桃花期長且花量大，因此市場上又用蒲桃花窨制低檔烏龍茶，制成花茶；且蒲桃花花粉花蜜均較多，香氣濃，又可成為良好的蜜源[1,2,13]。</p><p><b>　　4.2藥用</b></p><p>　　蒲桃與崗梅、鐵包金等共同組成石岐外感涼茶，具有疏風清熱、解暑消食、鎮(zhèn)咳等功效，臨床用于治療外感發(fā)熱、頭痛、咳嗽等癥狀和預防流行性感冒[1

73、4]。蒲桃具有抗炎抗菌等功效，可用于治療痘瘡、腸炎、痢疾。蒲桃種子提取物具有降低血糖之功效，可用于治療糖尿病。蒲桃果肉可治呃逆不止，肺胃虛寒所致咳嗽。海南蒲提取物對L6細胞砷中毒有緩解作用，可考慮將其應用到砷中毒的治療當中[15]。</p><p><b>　　4.3園林應用</b></p><p>　　蒲桃屬植物，桃金娘科，常綠喬木或灌木，樹形優(yōu)美，樹冠茂密，生長快

74、速，根系發(fā)達，具有強抗二氧化硫能力，可抗污染、防風，是良好的園林綠化樹種，且其枝繁葉茂，花香淡雅，亦可作為園景觀賞植物[3]。</p><p><b>　　5黃酮的藥理作用</b></p><p>　　據(jù)各種文獻及相關資糧記載，黃酮作為一類低分子的天然活性物質，具有對人體意義重大的多種生理活性。</p><p>　　張永忠[16]等人使用四種不

75、同濃度的異黃酮溶液進行對豬油的抗氧化實驗，實驗表明，異黃酮具有清除羥自由基、超氧陰離子自由基等作用，并且異黃酮中所含羥基個數(shù)及羥基位置的差異可能會影響其抗氧化能力。</p><p>　　黃酮具有抗腫瘤功效，可通過從多方面作用于腫瘤細胞而起到抑制腫瘤發(fā)生、增殖、遷移、侵襲等效果，包括抑制細胞周期、誘導細胞凋亡和影響細胞的信號傳導等[17]。</p><p>　　黃酮類物質對心血管系統(tǒng)也有明顯

76、的作用，其藥理作用主要有抑制血小板功能以減少血小板聚集，降低甘油三酯、低密度脂蛋白等以調節(jié)血脂水平，防止過氧化的低密度脂蛋白損傷血管細胞，和預防動脈粥樣硬化等方面[18]。</p><p>　　此外，黃酮類化合物的共同藥理作用還有抗炎、抗病毒、抗骨質疏松等[19,20]。</p><p><b>　　6黃酮的提取方法</b></p><p>　

77、　黃酮類化合物存在植物體內種類繁多，狀態(tài)不一，其對應的提取方法也各式各樣，有溶劑提取法、超聲提取法、超濾法、超臨界流體萃取法、酶解法、微波提取法、大孔樹脂吸附法等[21-23]。</p><p><b>　　6.1溶劑提取法</b></p><p>　　水提法由于提取效率差，雜質多，后處理繁雜，故不常用。常用的提取溶劑為甲醇和乙醇，而由于乙醇無毒安全性高，實際生產(chǎn)和研

78、究中往往更傾向于乙醇。極性小的溶劑，如氯仿、乙醚等和高濃度的醇（90%～95%）更適于提取苷元；苷類宜用極性較大的溶劑提取，如甲醇、乙醇、丙酮等，醇濃度為60%左右為宜。</p><p><b>　　6.2超聲提取法</b></p><p>　　超聲波提取原理是利用超聲波在液體中產(chǎn)生“空穴作用”，破壞植物細胞和細胞膜結構，從而增加細胞內容物通過細胞膜的穿透能力，有助于

79、黃酮類化合物的釋放與溶出。超聲波提取操作極其簡便，設備裝置簡單，無需另置加熱，提取效率高，可以避免高溫對提取成分的破壞。</p><p><b>　　6.3微波提取法</b></p><p>　　微波提取法是利用微波（頻率在300～300,000MHz之間的電磁波）的高頻電磁波穿透提取介質，加速被提取成分向提取溶劑界面的擴散速率，縮短提取組分分子的擴散時間，提高提取速

80、率。微波提取法環(huán)保、提取率高、速度快、節(jié)省溶劑、副產(chǎn)物少，可對其進行進一步的研究，擴大其在實際生產(chǎn)中的應用。</p><p>　　6.4超臨界流體萃取法</p><p>　　超臨界流體萃取法常使用CO2作為溶劑，其原理是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高

81、低和分子量大小的成分依次萃取出來。CO2穩(wěn)定、安全性高、無毒、來源廣，該提取方法萃取速度快、效率高、且沒有溶劑殘留的問題存在，屬于先進高效的新生技術，但是技術要求高、價格昂貴，目前還難以投入到實際大規(guī)模生產(chǎn)中。</p><p>　　7蒲桃中總黃酮的研究展望</p><p>　　蒲桃雖在傳統(tǒng)使用中歷史悠久，其在食用及園林綠化應用中較為常見，在民間使用頻率也不低，但其并未編入中華人民共和國藥典

82、當中，在臨床藥物應用中頻率低、范圍窄，沒有得到很好的推廣使用。一直以來對蒲桃的研究處于不溫不火的層面，至今還沒有形成一個全面系統(tǒng)的研究成果。但我們也可以看到，近幾年國內外對蒲桃的藥理作用、化學成分鑒定、提取方法等方面的研究也在不斷深入。隨著化學用藥副作用多、開發(fā)周期長、用藥相對昂貴等缺點的日益顯現(xiàn)，經(jīng)濟、來源廣、純天然的中藥藥物日益受到青睞。蒲桃在我國資源豐富，價廉易得，且安全性高，而黃酮類化合物具有多種對人體有利的生理活性，提取較易，

83、且研究程度較高，因此，對蒲桃中的總黃酮進行研究開發(fā)利用具備一定的可行性和經(jīng)濟效益。目前所做的針對蒲桃藥理的研究，多停留在蒲桃種子和蒲桃葉，對蒲桃莖的研究非常少，本次研究優(yōu)化蒲桃莖中總黃酮的提取工藝，可以為蒲桃的藥理研究、化學成分等提供可靠數(shù)據(jù)，使蒲桃得到更充分的開發(fā)利用。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 杜華波.熱帶亞熱帶果樹

84、——蒲桃[J].中國熱帶農業(yè)，2006，（02）：43.</p><p>　　[2] 溫放，梁桂友.蒲桃[J].廣西植物研究所，2012（04）：155.</p><p>　　[3] 陳定如.水翁、海南蒲桃、蒲桃、洋蒲桃[J].廣東園林，2007，29（03）：79-80.</p><p>　　[4] Djipa CD,Delmee M, Quetin-Lecler

85、cq J. Antimicrobial activity of bark extracts of Syzygium jambos(L.)alston (Myrtaceae)[J].Ethnopharmacol, 2000，71(1/2):307.</p><p>　　[5] Murugan S,Devi P,Parameswari NK,etal. Antimicrobial activity of Syzygi

86、um jambos against pathogens[J].Int J Pharm Sci,2011,3（2）：44.</p><p>　　[6] Avila-Pena D,Pena N,Quintero L,etal.Antinociceptive activity of Syzygium jambos leaves extract on rats [J]. J Ethnopharmacol,2007,112

87、（02）：380.</p><p>　　[7] 邱雪蓮，紀燁瑜，鄭卓君，等.海南蒲桃籽提取物降血糖效果的初步研究[J].今日藥學，2013，23（03）：145-147.</p><p>　　[8] 張亮亮，陳茄鴻,汪詠梅，等.海南蒲桃葉黃酮的提取及抗氧化性研究[J].生物質化學工程，2010，44（02）：27-30.</p><p>　　[9] 劉艷清.蒲桃莖、

88、葉和花揮發(fā)油化學成分的氣相色譜-質譜分析[J].精細化工，2008，25（03）：243-255.</p><p>　　[10] 羅濟文，陳淵,黎中良，等.差分脈沖伏安法測定蒲桃葉中蘆丁的含量[J].林產(chǎn)化學與工業(yè)，2009，29（03）：85-88.</p><p>　　[11] 林大都.蒲桃屬藥用植物蒲桃化學成分研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學，2013.</p><

89、;p>　　[12] 張鏡，刁樹平.海南蒲桃果實原花青素的體外抗氧化活性[J].食品科學，2012，33（17）：101-103.</p><p>　　[13] 陳洪德，張育松，張根火.蒲桃花茶的試制[J].福建茶葉，2000，（02）：33-34.</p><p>　　[14] 廖惠芳，葉木榮，李銳，等.石岐外感涼茶藥理實驗研究[J].新中醫(yī)，1994.</p><

90、;p>　　[15] Asmita Samadder，等.海南蒲桃提取物對L6細胞砷中毒緩解作用的體外實驗[N].中西醫(yī)結合學報，2012，10（11）：1293-1302.</p><p>　　[16] 張永忠，陳學穎，孫艷梅.四種異黃酮抗氧化活性的比較研究[J].食品科學，2008，（02）：383-386.</p><p>　　[17] 楊志峰，朱英，李珊珊.植物黃酮的抗腫瘤作用

91、及構效關系的研究進展[J].四川中醫(yī)，2011，29（09）：35-38.</p><p>　　[18] 田景梅，張揚，張云峰，等.黃酮類調節(jié)脂肪平衡與降低心血管疾病發(fā)生機制的研究進展[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（09）：5259-5351.</p><p>　　[19] 延璽，劉會青，鄒永青，等.黃酮類化合物生理活性及合成研究進展[J].有機化學，2008，28（09）：1534

92、-1544.</p><p>　　[20] 張齊雄，施倫勇，劉衍李，等.黃酮類稀土配合物抗骨質疏松癥應用展望[J].時針國醫(yī)醫(yī)藥，2012，23（06）：1503-1504.</p><p>　　[21] 李鳳林，李青旺，馮彩寧，等.天然黃酮類化合物提取方法研究進展[J].中國食品添加劑，2008.</p><p>　　[22] 蔡健，華景清，王薇，等.黃酮提取工藝

93、研究進展[J].淮陰工學院學報，2003，12（05）.</p><p>　　[23] 趙子龍，薛培鳳，倪佩東，等.天然藥物中總黃酮的提取工藝研究進展[J].內蒙古醫(yī)學院學報，2012，34（06）：512-516.</p><p><b>　　致謝</b></p><p>　　本論文是在何洋老師的悉心指導下完成的，在論文實驗進行過程中，老師給