雞脂肪組織和骨骼肌miRNA的篩選和表達研究.pdf

1、microRNA(miRNA)是一類非編碼的22 nt左右的小RNA,它廣泛存在于各種生物體中,通過對靶mRNA的翻譯抑制和降解對基因的表達起負性調(diào)節(jié)作用。miRNA參與了包括增殖、分化、凋亡、發(fā)育等很多生物過程。
　　 本研究構(gòu)建了4周齡肉雞脂肪和骨骼肌中小分子RNA的cDNA文庫,脂肪文庫中篩選出44個已公布雞miRNA,共16種,39個與其他物種同源miRNA,共5種；骨骼肌文庫中篩選出81個已公布雞miRNA,共27種,

2、31個與其他物種同源miRNA,共4種。通過進一步分析,預(yù)測出11個脂肪中潛在新miRNA,共9種,7個骨骼肌中潛在新miRNA,共4種。通過已測出的各種miRNA序列在雞基因組中的定位,找到5個miRNA基因簇,其中4個基因簇各含有2個miRNA基因,1個基因簇含有4個miRNA基因。在測出的miRNA序列中,通過對相同miRNA序列分析,發(fā)現(xiàn)其中一些相同miRNA含有不同的序列,即miRNA序列存在多樣性。
　　 采用生物信

3、息學(xué)方法,運用miRNA靶基因預(yù)測軟件miRanda和TargetScan對脂肪和骨骼肌中miRNA的靶基因進行預(yù)測,在脂肪的250個表達基因中預(yù)測出192個潛在靶基因,在骨骼肌的250個表達基因中預(yù)測出216個潛在靶基因。并對其中每個miRNA的潛在靶基因數(shù)和與每個潛在靶基因相互作用的miRNA數(shù)進行了統(tǒng)計。這些結(jié)果為進一步研究雞脂肪和骨骼肌中miRNA的靶基因奠定了基礎(chǔ)。
　　 運用TaqMan實時熒光定量PCR技術(shù),結(jié)合s

4、tem-loop法對文庫中的10個miRNA進行雞12個組織表達量的檢測。結(jié)果顯示,gga-miR-133a和gga-miR-1a在肌肉中特異表達,提示它們在雞肌肉的生長發(fā)育中可能起重要作用；gga-miR-122在肝中表達量最高,在脂肪中有少量表達,提示它可能參與雞脂肪酸代謝和脂肪生長發(fā)育:gga-miR-22、gga-miR-199、miR-23a和miR-145在心肌和肌胃中表達量高,而在骨骼肌中表達量卻很少,提示它們在不同的肌肉