暗黑鰓金龜幼蟲發(fā)酵腔可培養(yǎng)細菌多態(tài)性與超微結構研究.pdf

1、暗黑鰓金龜（Holotrichia parallela）是我國重要的農業(yè)害蟲，數量巨大，分布廣泛。其幼蟲與成蟲均可對作物造成嚴重的危害。本文對暗黑鰓金龜幼蟲后腸發(fā)酵腔可培養(yǎng)細菌多樣性和發(fā)酵腔超微結構進行研究，為闡明發(fā)酵腔可培養(yǎng)菌的群落結構組成及發(fā)酵腔的結構與功能，微生物與寄主的協(xié)同進化及共生微生物對寄主的作用提供理論基礎，最終為利用微生物防治此類害蟲提供新的思路。
　　 本研究首先通過微生物的培養(yǎng)、分離及PCR-DGGE分子技術

2、研究了暗黑鰓金龜3齡幼蟲發(fā)酵腔內可培養(yǎng)菌的群落組成，然后利用切片及顯微技術詳細研究了不同發(fā)育階段發(fā)酵腔超微結構的變異。主要研究結果如下：
　　 利用細菌平板計數得知發(fā)酵腔可培養(yǎng)細菌為33.4×107cfu/ml；而通過熒光染色計數可知發(fā)酵腔細菌總數為1.67x1010/ml，可見發(fā)酵腔內大量細菌是不可培養(yǎng)的。
　　 從暗黑鰓金龜幼蟲后腸發(fā)酵腔中分離到38種不同遺傳型細菌，分屬于腸桿菌科的腸桿菌屬（Enterobacter

3、）、Grimontella屬、檸檬酸桿菌屬（Citrobacter）、沙門氏菌屬（Salmonella）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella）、奈瑟氏菌科（Neisseriaceae）不動桿菌屬（Acinetobacter）、巴斯德菌科（Pasteurellaceae）的嗜血桿菌屬（Haemophillus）、伯克氏菌科（Burkholderiaceae）的纖發(fā)菌屬（Leptothrix）、梭菌科（Clostridiaceae）的梭狀芽

4、胞桿菌屬（Clostridium）和CFB菌群（Cytophaga-flexibacter-bacteroides group）。
　　 其中腔壁好氧菌11種不同遺傳型，分屬于腸桿菌科的4個屬：腸桿菌屬、Grimontella屬、檸檬酸桿菌屬和沙門氏菌屬。從各屬的分布情況來看，有7種不同遺傳型細菌屬于腸桿菌屬，細菌數量占發(fā)酵腔腔壁好氧菌的84.62％，為優(yōu)勢菌群；有2種不同遺傳型細菌屬于Grimontella屬，占12.31％；

5、1種屬于檸檬酸桿菌屬，占3.08％；1種屬于沙門氏菌屬，占1.54％。
　　 腔液好氧菌11種，分屬于腸桿菌科的克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和沙門氏菌屬以及奈瑟氏菌科的不動桿菌屬。從各屬的分布比例來看，有5種不同遺傳型細菌屬于克雷伯氏菌屬，占20.26％；有4種不同遺傳型細菌屬于腸桿菌屬，占75.82％，為主要優(yōu)勢菌；1種屬于沙門氏菌屬，占1.96％；1種屬于不動桿菌屬，占1.96％。
　　 腔壁厭氧菌8種，分屬于腸桿菌科的醋

6、酸桿菌屬、腸桿菌屬，巴斯德菌科的嗜血桿菌屬，伯克氏菌科的纖發(fā)菌屬以及梭菌科的梭狀芽胞桿菌屬。各屬的分布情況為：有3種不同遺傳型細菌屬于檸檬酸桿菌屬，占64.39％；一種屬于腸桿菌屬，占12.12％；1種屬于嗜血桿菌屬，占6.06％； 1種屬于纖發(fā)菌屬，占3.79％； 1種屬于梭狀芽胞桿菌屬，占5.30％。
　　 腔液厭氧菌8種，分屬于兩個不同類群，即克雷伯氏菌屬和CFB菌群。其中有4種不同遺傳型細菌屬于克雷伯氏菌屬，占52.63

7、％；有4種不同遺傳型細菌屬于CFB菌群（Cytophaga-flexibacter-bacteroides group），占47.37％，兩類細菌含量差別不大。
　　 發(fā)酵腔超微結構研究結果表明，暗黑鰓金龜幼蟲發(fā)酵腔由外向內主要由3部分組成：肌肉層（包括橫肌和縱肌），上皮細胞層和發(fā)酵腔內膜。不同發(fā)育階段發(fā)酵腔超微結構，特別是由腸壁細菌形成的菌膜復合體存在明顯變化：1齡幼蟲發(fā)酵腔結構缺少內膜層，細菌數量很少，直接附著在上皮細胞細胞