牙鲆變態(tài)期間骨骼發(fā)育和其相關基因Sox9，Bmp4和Bmp2的表達分析.pdf

1、牙鲆是我國重要的經濟魚種之一，它胚后有一個特殊的變態(tài)發(fā)育過程，在這期間形態(tài)和生活習性上都有一個極大的轉變，死亡率較高，因此研究牙鲆變態(tài)發(fā)育以降低其死亡率可以直接提高牙鲆的產量。牙鲆變態(tài)發(fā)育中骨骼形態(tài)發(fā)生了巨大的改變，骨骼發(fā)育過程中有明顯的增生、消融和遷移的現(xiàn)象，但在這方面的研究目前還較少。 本研究采用骨骼三重染色的方法對牙鲆仔魚從變態(tài)發(fā)育前至變態(tài)發(fā)育結束的五個時期的仔魚進行整體染色，以期對牙鲆變態(tài)發(fā)育期間其骨骼發(fā)育情況進行系統(tǒng)分

2、析。利用不同的顏色清晰地標識出牙鲆變態(tài)發(fā)育期間軟骨和硬骨的分化、遷移和生長的過程以及牙鲆右眼移位中神經的遷移方向以及變態(tài)發(fā)育后神經的分布情況。結果表明，牙鲆變態(tài)前期仔魚軟骨比例較高，隨著發(fā)育的進行，軟骨明顯發(fā)生遷移和體積縮小，與此同時，硬骨則逐漸發(fā)育成熟。 此外，為進一步研究骨骼發(fā)育分化的機理，本研究克隆了牙鲆Bmp4、Sox9和Bmp2基因，并對其在變態(tài)發(fā)育過程不同時期仔魚和成魚不同組織的表達進行了半定量研究，以探索這些基因的

3、時空表達特征。對不同時期仔魚的半定量RT-PCR結果表明，未檢測到Bmp2基因在胚胎和仔魚階段的表達；Bmp4在仔魚階段有少量表達且總體上隨著牙鲆的變態(tài)發(fā)育其表達量呈遞減趨勢；Sox9在仔魚階段表達量較高，在出膜后仔魚中表達量先升高，后隨著變態(tài)發(fā)育的發(fā)生，軟骨分化結束表達量遞減。通過熒光定量的結果分析，Bmp4和Sox9在仔魚階段的前三個時期以約15％的量遞減，在變態(tài)Ⅳ期也就是牙鲆右眼移至頭頂、形態(tài)發(fā)生巨大轉變的變態(tài)高峰期表達量有顯著降