栗疫病菌程序性細胞死亡與相關基因功能研究.pdf

1、栗疫病菌是栗樹上毀滅性的病害之一，其引起栗樹枝干潰瘍病是栗生產上的病害之一。由于栗疫病菌難以防治，普通的化學防治比較困難。栗疫病菌的細胞死亡與相關基因的研究，可以為尋找新的殺菌劑靶標，設計新的病害控制策略提供理論指導。
　　 營養(yǎng)體不親和性誘導栗疫病菌菌株間程序性細胞死亡為了驗證營養(yǎng)體不親和性導致細胞凋亡的特征，主要進行了融合細胞基因組DNA降解的瓊脂糖電泳檢測，細胞學研究主要是細胞核變化的染色，活性氧產生的測定，脂肪粒染色以及

2、融合細胞的死活檢測。實驗結果表明混合孢子涂板基因組DNA降解瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA梯狀條帶，這一結果為營養(yǎng)體不親和性誘導的細胞死亡提供了新的證據，細胞學研究觀察到細胞核的降解，活性氧的變化以及脂肪粒的積累，融合細胞的死亡，與凋亡類細胞死亡相似。
　　 外源過氧化氫對栗疫病菌低毒力菌株EP713四種抗氧化酶的影響用外源的氧化壓力模擬寄主的氧迸發(fā)影響，用10mM過氧化氫處理低毒力菌株EP713與野生型菌株EP155不同時間取樣，測

3、定處理菌絲的四種抗氧化酶活性，結果表明EP155與EP713的四種抗氧化酶的活性達最大值時的活性有差異，但谷胱甘肽還原酶與谷胱甘肽過氧化物酶出現(xiàn)最大值的時間野生型菌株比低毒力菌株較晚，活性較高。說明低毒力病毒對栗疫病菌抗氧化能力可能有影響。
　　 過氧化氫誘導栗疫病菌分生孢子細胞死亡對外源氧化壓力誘導栗疫病菌分生孢子的細胞死亡進行了研究。過氧化氫亞致死與致死濃度為10 mM與150 mM;對過氧化氫影響分生孢子萌發(fā)的時間效應進行

4、了分析和細胞學研究，細胞學主要觀察細胞核的變化，活性氧與一氧化氮的產生，以及電泳檢測DNA降解，實驗結果表明外源的氧化壓力引起細胞核的變化，活性氧隨處理時間增長不斷增多，一氧化氮產生主要是150 mM處理30 min，電泳結果沒有檢測到DNA梯狀條帶，表明外源的氧化壓力誘導栗疫病菌分生孢子的細胞死亡，這種細胞死亡細胞核發(fā)生降解，且這種細胞死亡與活性氧和一氧化氮的產生相關。
　　 栗疫病菌核糖基化因子1(ARF1)基因功能的表型效

5、應在COGEME數據庫栗疫病菌EST中搜索到CpARF1，克隆了CpARF1全長，并進行了聚類分析與同源性比較，該基因具有保守的高爾基體結合的結構域MXXE;利用轉錄基因沉默技術研究了該基因在栗疫病菌中的功能，沉默突變體表現(xiàn)出對硫酸銅與氟化鈉的敏感，漆酶產生減少，無性孢子產生減少或不產生，并且導致致病性減弱。結果表明栗疫病菌CpARF1可能影響栗疫病菌對硫酸銅與氟化鈉的敏感性，漆酶產生，無性繁殖以及致病性。
　　 栗疫病菌泛素核

6、糖體L40融合蛋白基因功能的表型效應在COGEME數據庫栗疫病菌EST中搜索到Cp UFP，克隆并分析了栗疫病菌中泛素融合蛋白Cp UFP。該基因氨基酸含有典型的結合泛素結合酶的結構域，系統(tǒng)進化上與其它絲狀子囊菌的親緣關系較近。利用轉錄基因沉默技術研究了該基因在栗疫病菌中的功能，沉默突變體表現(xiàn)出對過氧化氫與氯化鈉的敏感，漆酶的產生減少，無性孢子產生減少或不產生，并且導致致病性減弱。結果表明Cp UFP基因可能影響栗疫病菌對過氧化氫與氯化